En un tampón de muestra estándar para una SDS-PAGE deberá contener siempre Azul de coomasie-SDS-DTT Azul de bromofenol-SDS-Betamercaptoetanol Azul de coomasie-SDS-Sucrosa-Betamercaptoetanol Azul de bromofenol-SDS-Sucrosa-Agente reductor.
El glicerol se utiliza en la PCR para evitar la difusión pues le da mayor densidad al DNA que se requiere amplificar Verdadero Falso.
Cuando realizamos una SDS-PAGE la idea es siempre denaturar las proteínas para que migren por carga y tamaño Verdadero Falso.
Sobre la frase: "El SDS se une a las proteínas estequiométricamente" usted diría Verdadero Falso.
Cuando trato las proteínas con SDS para realizar una separación de una proteína de interés yo quiero: Que las proteínas tengan la misma forma para que migren únicamente por carga Que las proteínas tengan la misma carga para que migren únicamente por tamaño Que las proteínas tengan el mismo peso molecular para que migren únicamente por carga Que las proteínas tengan la misma carga para que migren únicamente por forma.
La denaturación de la proteínas ocurre por acción del Azul de bromofenol del tamón de muestra al que estas se someten Verdadero Falso.
El agente diseñado para romper los enlaces disulfuro de la estructura de las proteínas es el Ditrioteitol-Beta-mercaptoetanol (DTT-BMT) Verdadero Falso.
Sobre una de las carácteristicas más importante de la migración es un gel de electroforesis es que: Las moléculas más grandes migrarán más rápido que las pequeñas Las moléculas pequeñas migrarán más rápido que las grandes. La bisacrilamida forma poros diferencialmente Las moléculas pequeñas tenderán a cruzarse con el entramado.
Una SDS-PAGE es una técnica de separación y análisis de proteínas muy reproducible. Sobre si usted utilizaría geles a gradiente para maximizar la tasa de separación de las moléculas usted diría: Si No No sabe/No responde.
El azul de bromofenol sirve para demarcar el frente de corrido en una electroforesis tanto en agarosa como en poliacrilamida Verdadero Falso.
De la caja procesos usted deberá escoger cuales son los pasos que se requieren para realizar un Wetern-Blot, por favor seleccionelos y ordenelos 10-7-9-5-4 2-10-6-7-9 2-9-10-6-7 2-8-6-7-9.
Sobre este proceso usted puede decir que: Es un revelado de un Southern-Blot Es una confirmación de un Dot-Blot Es un complejo conjugado con un anticuerpo primario Es un complejo conjugado con un anti-anticuerpo que se acopló a una enzima cromogénica como la estreptavidina Es un complejo conjugado anclado a un sustrato cromogénico por medio de enzimas como la peroxidasa.
En un inmunoblot es posible usar directamente un complejo conjugado con anticuerpo primario Verdadero Falso.
¿La disminución en la concentración determina el aumento de la fuerza iónica en una cromatografía de intercambio iónico al hacer que la separación ocurra más rápido? Verdadero Falso.
¿Cual de los siguientes métodos puede separar proteínas basado en su masa Centrifugación Cromatografía por intercambio iónico SDS-PAGE Más de una opción es correcta.
Pablo tiene una mezcla de proteínas y quiere separarlas como primer paso en su proyecto para Biología. El quiere demostrar que la miocina es una de las proteínas que más se expresa en personas que hacen mucho ejercicio. Ahora bien, el tiene las células y todo el material que se necesita en la elaboración de un buen proyecto a escala para demostrar su hipótesis. Teniendo en cuenta esto cual cromatografía le recomendaría usted para poder separar de forma eficiente. (Asuma que los recursos son ilimitados) Cromatografía de intercambio iónico pues se puede regular el flujo de la elusión por medio de la cantidad de muestra que se incorpora Cromatografía de afinidad pues se pueden utilizar columnas de gran tamaño que permitan una buena diferenciación de las muestras Cromatografía de exclusión molecular pues se puede utilizar una columna bastante ancha con un colector de fracciones que maximicen la separación de los flujos de proteínas SDS-PAGE anclado a un Western-Blot para poder separar de manera eficiente los compuestos sin escatimar en costos.
En la cromatografía de afinidad es muy relevante el tamaño de la columna incluso más que en la cromatografía de exclusión molecular Verdadero Falso.
El fundamento en la separación de proteínas por SDS-PAGE es la Verdadero Falso.
Son agentes intercalantes de las proteínas y el ADN el GelRED y el Azul de coomasie respectivamente Verdadero Falso.
Las proteínas son monómeros, así como los aminoácidos son sus polímeros Verdadero Falso.
¿Cuántos aminoácidos codifica el DNA humano? 25 20 18 13.
La estructura primaria de una proteína se caracteriza por: Presentar las denominadas helices Alfa y láminas Beta Estar unidas por enlaces peptídicos Manetener su estructura gracias a los puentes disulfuro Conferir la función de la proteína.
Cecilia estaba tratando de realizar un SDS-PAGE para poder separar una mezcla de proteínas entre las cuales se encontraban: (Proteína K: 65kDa con carga positiva y Proteína X: 72kDa con carga negativa). Al someter esta mezcla a denaturación, Cecilia olvidó por completo el proceso por ponerse a armar la cámara electroforética con el gel. Al hacer el corrido, se observaban una gran mancha. Cecilia cree que las proteínas se degradaron completamente y ya no son funcionales para el proceso. El problema es que estas proteínas son del cuerpo de un cadaver y ya no hay más acceso a éste. ¿Como microbiologo usted que podría recomendarle a Cecilia para que pueda solucionar este impase? Recurrir al CTI para poder obtener un permiso especial y volver a acceder al cadaver Agregar un agente renaturador como el Bromuro de Etidio para permitir la reestructuración de las proteínas Hacer una diálisis para poder renaturar por capilaridad la proteína de interés Agregar valina que promueve la renaturación de moléculas de interés biológico como las proteínas y el ADN.
El número de diferentes secuencias de un polímero de 4 aminoácidos es de 204 (160.000) Verdadero Falso.
El esqueleto del polipéptido se dobla en una espiral mantenida por puentes de hidrogeno entre átomos de oxigeno y de hidrogeno. Esta descripción corresponde a Las láminas ALFA de las proteínas Las helices que forma el ADN Las helices ALFA que forma las proteínas Las láminas que forma el ADN.
Diga si esta frase se cumple únicamente para PROCARIOTAS y EUCARIOTAS: "La estructura terciaria de las proteínas es estabilizada por los puentes de hidrógeno y los puentes disulfuro" Sólo aplica para PROCARIOTAS Sólo aplica para EUCARIOTAS Aplica tanto para PROCARIOTAS como para EUCARIOTAS La frase es completamente FALSA.
Los enlaces G-C se caracterizan por Presentar 2 puentes de hidrógeno Presentar 4 puentes de hidrógeno Presentar 3 puentes de hidrógeno Ser ambos de doble anillo.
La ADENINA y la TIMINA se caracterizan por tener una estructura de anillo sencillo y doble respectivamente Verdadero Falso.
Son pirimidinas ADENINA Y TIMINA GUANINA Y CITOSINA URACILO Y TIMINA ADENINA Y CITOSINA.
Por favor indique la secuencia complementaria a:
AAGCTTAGCTTTGCTTTCGGGTCC 5' TTCGTATCGAAACGAAAGCCCAGG 3' 3´TTCGAATCGAAACGAAAGCCCGAG 5´ 3' TTCGTATCGAAACGAAAGCCCAGG 5' 3' TTCGAATCGAAACGAAAGCCCAGG 5'.
Selecciones las enzimas necesarias en la replicación del ADN: Taq Polimerasa ADN Polimersa III ADN Polimersa I Topoisomerasa Helicasa RNAsaH Primasa DNA Ligasa EcoRI PsteII.
Las topoisomersas permiten separar las cadenas de DNA, mientras que las helicasas se encargan de estabilizar los superenrrolamientos de la doble hélice Verdadero Falso.
Sobre este esquema referente al dogma central de la biología molecular usted diría que Esta mal porque no involucra a los virus Esta mal porque no involucra la reversión de la información de proteína a ADN Esta mal porque no involucra la reversión de la información de ARN a ADN Esta bien porque es a lo que han llegado las investigaciones más recientes.
Los intrones son los agentes codificantes del DNA y los exones lo que participa del Splicing diferencial al que se somete el mARN Verdadero Falso.
Diga si esta frase APLICA exclusivamente para PROCARIOTAS o para EUCARIOTAS: "El RNA mensajero contiene tanto intrones NO codificantes y exones codificantes que son reconocidos por los ribosomas para la sintetización de proteínas" Aplica sólo para eucariotas Aplica para ambos Aplica sólo para procariotas No aplica para ninguno.
Diga si esta frase APLICA exclusivamente para PROCARIOTAS o para EUCARIOTAS: "El RNA mensajero contiene tanto intrones NO codificantes y exones codificantes que son reconocidos por los ribosomas para la sintetización de proteínas" Sólo aplica en PROCARIOTAS Sólo aplica en EUCARIOTAS No aplica en ninguno de los casos.
Los fragmentos de Okazaki se atribuyen a la cadena lider que se está sintetizando en el proceso de replicación del ADN y son unidos por medio de Ligasa y reparados por la ADN Polimersa III Verdadero Falso.
Diga si esta frase APLICA exclusivamente para PROCARIOTAS o para EUCARIOTAS: "La transcripción y la traducción de genes es un proceso que se encuentra acoplado" Sólo aplica para eucariotas Sólo aplica para procariotas Aplica tanto para eucariotas como procariotas No aplica para ninguno.
Los priones son proteínas que hacen que afectan la funcionalidad de la estructura de su proteína homóloga haciendo que cambien de estructura Lámina-BETA a Hélice -ALFA Verdadero Falso.
En un SDS-PAGE bajo condiciones específicas la tasa de migración de las muestras es constante Verdadero Falso.
Sobre la cromatografía usted puede decir que: Es un método de separación muy eficiente pero muy costoso Del tamaño de la columna depende qué tan cercanos estén las moléculas de interés Es un método bastante reproducible pero poco estandarizado Es un método que no es reproducible pero si está bien estandarizado.
Diga si esta frase APLICA exclusivamente para PROCARIOTAS o para EUCARIOTAS: "Un diferencia entre la replicación y la transcripción es que la DNA polimerasa no puede poner el primer nucleótido como lo hace la RNA polimerasa" Sólo aplica para PROCARIOTAS Sólo aplica para EUCARIOTAS Aplica tanto para PROCARIOTAS como para EUCARIOTAS Ninguna de las anteriores.
Diga si esta frase APLICA exclusivamente para PROCARIOTAS o para EUCARIOTAS: "Los cromosomas celulares únicamente poseen dos orígenes de replicación" Sólo aplica para PROCARIOTAS SÓLO APLICA PARA EUCARIOTAS aplica para ambos ninguna de las anteriores.
Diga si esta frase APLICA exclusivamente para PROCARIOTAS o para EUCARIOTAS: "Para llevar a cabo un proceso de transcripción del DNA la RNA polimerasa deberá asociarse con un factor sigma que le sirve de cofactor para posteriormente identificar el promotor e iniciar el proceso" Sólo aplica para EUCARIOTAS Aplica tanto para Eucariotas como para Procariotas Sólo aplica para PROCARIOTAS No aplica para ninguno.
Diga si esta frase APLICA exclusivamente para PROCARIOTAS o para EUCARIOTAS: "La caja TATA es una secuencia de ADN (secuencia consenso) encontrada en la región promotora de los genes y se encuentra asociada en el proceso de transcripción" Sólo aplica para eucariotas Sólo aplica para procariotas Aplica tanto para procariotas como para eucariotas No aplica para ninguno de los grupos mencionados.
Diga si esta frase APLICA exclusivamente para PROCARIOTAS o para EUCARIOTAS: "La cadena nueva tanto de ADN como de ARN crece por adición de nucleótidos en el 3'OH libre" Sólo aplica para procariotas Aplica tanto para procariotas como para eucariotas Sólo aplica para eucariotas No aplica para ninguno de los grupos.
Diga si esta frase APLICA exclusivamente para PROCARIOTAS o para EUCARIOTAS: "El ARN mensajero o pre-mRNA sintetizado a partir del proceso de transcripción deberá pasar por un proceso de Splicing alternativo para poder ser codificante" Sólo aplica para procariotas Sólo aplica para Eukarya Sólo aplica para ARCHAEAS No aplica para ninguno de los anteriores.
Diga si esta frase APLICA exclusivamente para PROCARIOTAS o para EUCARIOTAS: "Las moléculas de ARN policistrónico son exclusivas de organismos sin núcleo definido" Sólo aplica para procariotas Sólo aplica para eucariotas Sólo aplica para archaeas No aplica para ninguna de las anteriores.
Sobre el proceso de maduración del mRNA por favor indique los pasos en su orden estricto: Adición de poliA-Capping-Splicing Splicing-Capping-Adición de poliT Adición de los casquetes-Capping-Splicing Adición poliG-Adición poliA-Splicing Capping-Adición poliG-Splicing.
Sobre la maduración del mRNA se puede decir que consiste en dejar la isoforma de un gen sin intrones para que sea codificante Verdadero Falso.
Sobre el proceso de maduración del RNA usted puede decir que el splicing no elimina únicamente intrones, también elimina exones Verdadero Falso.
Por cada dos exones, necesariamente tengo 1 intron. En este sentido cuantos intrones tendría si tengo un pre-mRNA con 781 exones 390 390.5 391 392.
Los seres humanos tenemos aproximadamente de 20 a 25000 genes Verdadero Falso.
Los iónes Magensio son importantes tanto en la replicación como el la transcripción Verdadero Falso.
Sobre este proceso usted podría decir que La glucosa promueve el efecto alostérico ejercido sobre el promotor por acción del IPTG La glucosa disminuye los niveles de AMPc ejerciendo una represión del catabolito La lactosa impide que el complejo CAP-CRP se una al represor permitiendo el paso de la RNA polimerasa para poder hacer la transcripción del gen La verdadera molécula inductora del operón lac es la alolactosa, un isómero de la lactosa que se obtiene por una transglicosilación llevada a cabo ocasionalmente por la β-galactosidasa.
Si no hubiera Glucosa o Lactosa pero si hubiera IPTG usted pensaría que en una caja de Petri las colonias se verían Blancas por inducción del operador y asociación con la Beta-Galactosidasa pues este sustrato es muy afín a la enzima Sin ningún cambio pues así haya expresión del operón lac y sintetización de Beta-Galactosidasa, las colonias no sufrirán cambios visibles pues IPTG no es sustrato de esta enzima Aunque esta enzima no degrada el IPTG (análogo de la lactosa) las placas se pueden diferencias con un marcador especial de selección de las colonias Habrá gran producción de Beta-Galactosidasa pero no habrá cambios y las colonias podrían morir por falta de sustratos.
Si no hubiera lactosa en el medio, usted esperaría que las colonias Siguieran viviendo pues ellas degradan otras fuentes de carbono alternativas El operón lac no se expresara por impedimento estérico del represor lacI a la Beta-Galactosidasa La proteína represora Lac I mantenga su elevada afinidad por la región operadora, impidiendo que la RNA polimerasa transcriba los genes estructurales. De esta forma, el sistema permanece cerrado con el consecuente ahorro energético para la bacteria. Que la Beta-Galactosidasa se expresara en una menor cantidad debido a que el marcador de elección permite expresar el gen estructural lacZ que hace que se controle la permeabilidad de la membrana celular.
Si en lugar de IPTG hubiera X-GAL usted podría pensar que El complejo cAMP se puede unir corriente arriba de la cadena promoviendo un cambio alostérico en el lacI que se une al promotr para generar una gran producción de RNA polimerasa y que las colonias en placa se vean azules Las colonias se verán azules por inducción con el complejo cAMP y la Beta-Galactosidasa de esta manera habrá mucha enzima y poco sustrato haciendo que tenga un parecido al indol Las colonias se verán blancas por inducción de un cambio alostérico del lacI permitiendo que el promotor quede libre para que la RNA polimerasa transcriba los genes estructurales y haya gran producción de Beta-Galactosidasa como lo muestra la imagen Ninguna de las anteriores.
Sobre el complejo cAMP usted puede decir que: Permite regular las concentraciones del represor lacI para no inactivar del todo la expresión de los genes del operón lac Permite regular las concentraciones de lactosa en la célula para transcribir de manera eficiente el gen lacZ Tiene una relación negativa con la glucosa por lo cual cuando ésta se encuentra en elevadas concentraciones se inhibe la producción del complejo Es un tetrámero que se une de manera covalente al promotor para permitir la expresión de la Beta-Galactosidasa.
En presencia de lactosa y glucosa el complejo cAMP Se va a unir covalentemente al represor para permitir una expresión moderada del gen No se va a unir de forma exitosa al represor para permitir una expresiónm alta del gen No se va a unir de forma exitosa al promotor pero aún así la lactosa inhibe parcialmente al represor permitiendo una expresión moderada del gen No se va a unir de forma exitosa al represor pero va a promover que la lactosa si lo haga para inhibirlo parcialmente permitiendo una expresión moderada del gen.
El IPTG es un sustrato artificial de la Beta-Galactosidasa y permite ser transportado eficientemente dentro de la célula Verdadero Falso.
El X-GAL se utiliza en la expresión del operón lac como un indicador Verdadero Falso.
Para poder confirmar la expresión del operón lac y la producción de BETA-GALACTOSIDASA usted puede: Sembrar una colonia con X-GAL e IPTG y lisar las células con plásmidos recombinantes para así discenir quien expresa el gen y quien no Sembrar una colonia con Galactosa e IPTG e infectar las células con fagos naturalmente afines a la bacteria e.g. E. coli para poder discernir por los diámetros quien es el que expresa el gen o no Sembrar una colonia con X-GAL e IPTG e infectar las células con un fago. Si las placas de lisis son azules hay expresión del gen funcional, si no lo son no hay expresión del gen o el gen no es funcional. Esto es suceptible de ser cuantificado Sembrar una colonia con X-GAL con IPTG e infectar con plásmidos recombinantes y un marcador de selección si hay placas de lisis azules es porque sobrevivieron y hay expresión del gen. Esto también se podría cuantificar.
Luego de haber infectado las células de las bacterias con un fago para determinar la expresión de los genes funcionales, usted puede decir que si hay palcas de lisis azules es porque hay expresión de Beta-Galactosidasa funcional y si son blancas es porque la enzima no es funcional o la bacteria no tiene la maquiaria Verdadero Falso.
Las exonucleasas de restricción constituyen un mecanismo de defensa de algunas bacterias contra DNA foráneo Verdadero Falso.
Sobre el proceso de transcripción que se ilustra en la imagen es correcto decir que: La RNA polimerasa se asocia con el inductor BETA e inician la transcripción La RNA polimerasa se asocia con σ70 uniéndose a las secuencias -35 y -10 La dirección de la transcripción es 3' a 5' cuando la RNA polimerasa se une a la región ALFA del promotor La dirección de la transcripción es 5' a 3' cuando la RNA polimerasa se une al promotor en la región B'.
Los fagos tienen un ciclo de vida compuesto en donde se puede presentar una fase lítica que incluye una etapa de profago y una fase lisogénica que incluye una etapa de sintetización de nuevos fagos Verdadero Falso.
En las genotecas de expresión se quieren 1.___________________ en sistemas 2.________________ 1. expresar genes funcional 2. sistemas eucariontes 1. expresar genes colaterales 2. sistemas procariontes 1. expresar proteínas funcionales 2. sistemas procariontes 1. expresar genes codificantes 2. sistemas eucariontes.
Por favor ordene los pasos para realizar una genoteca de expresión:
A. Infectar a E. coli
B. Proteger con EcoRI metilasa
C. Ligar a lambda y ensamblar los fagos
D. Cortar con EcoRI
E. Adicionar linker EcoRI
F. Purificación del RNA maduro
G. Sintetizar la primera cadena
H. Sintetizar la segunda cadena. F-G-H-B-E-D-C-A F-G-B-H-E-D-C-A F-B-G-H-E-D-C-A F-B-G-E-H-D-A-C.
Una característica principal de la Sintesis de la Segunda Cadena de ADN a partir de RNA en genotecas de expresión es que: Se utilizan colas de poliT Se utilizan fragmentos de EcoRI Se degrada el RNA por completo Se adiciona una exonucleasa de tipo II.
Para la sintetización de la primera cadena de cDNA en genotecas de expresión y en cualquier evento donde se evalúa la expresión usted debe utilizar Transcriptasa reversa DNa polimerasa dependiente de RNA Transcriptasa reversa dependiente de RNA Transcriptasa reversa dependiente de los operadores lac.
La purificación del mRNA en un expreimento donde se evalúe expresión de genes se debe hacer preferiblemente por Cromatografía de afinidad Cromatografía de intercambio iónico Cromatografía de exclusión molecular Cromatografía de filtración en gel SDS-PAGE.
Para garantizar que el DNA foráneo se pueda ensamblar en la región reemplazable de forma eficiente usted debe Ligar con DNAsa pancreática bovina Ligar con DNA ligasa para asegurar que los extremos se unan Tratar el DNA a ensamblar y los extremos de la región de múltiple clonaje previamente con fosfatasa alcalina Tratar el DNA a ensamblar con EcoRI metilasa para asegurar que las exonucleasas de restricción no lo corten.
Al usted utilizar el fago lambda gt11 y seguir el proceso descrito en la imagen, usted espera que las colonias que se vean en placa de lisis sean Blancas por que no hay expresión de la proteína fusión Blancas pues como es una proteína de fusión no habrá producción de Beta-Galactosidasa Azules pues en un medio con ITPG y X-GAL siempre habrá expresión de Beta-Galactosidasa así haya una proteína fusión Azules pues si no hay un buen inserción del gen habrá expresión de única de los genes de la Beta-Galactosidasa.
En una genoteca de exrpesión, el empaquetamiento in vitro hace referencia al ensamblaje de cabezas y colas de un fago que ya es recombinante Verdadero Falso.
El proceso por el cual se obtienen recombinantes a partir de una infección a bacterias con plásmidos se denomina Transformación Transducción Conjugación.
Un fago cualquier, por ejemplo el fago lambda de E. coli se caracteriza porque en su genoma posee Un concatámero reemplazable, el DNA de la cabeza y el DNA de la cola Una región reemplazable, el DNA de la cabeza y el DNA de la cola Una región reemplazable, el DNA de funciones líticas, el DNA de la cabeza y el DNA de la cola El DNA de funciones líticas, una región reemplazable, el DNA de la cabeza y el DNA del concatámero.
El tamaño de un fago lambda o al menos de su región reemplazable tiene un tamaño aproximado de 49-50Kb Verdadero Falso.
La región reemplazable de un fago se encuentra entre los extremos Cos de los concámeros Verdadero Falso.
En el método de Nick translation se realizan cortes enzimáticos en secuencias específicas en el DNA y después se reparan con una DNA polimerasa utilizando nucleótidos marcados Si No.
Por favor ordene los pasos para clonar en un vector plasmídico:
A. Sembrar en medio de cultivo selectivo
B. Extraer, purificar o sintetizar el DNA.
C. Extraer los plásmidos de un extracto celular
D. Cortar el plásmido y el target de interés con enzimas de restricción
E. Transformar las células bacterianas
F. Agregar DNA ligasa
G. Clonar, replicar y almacenar B-D-C-F-E-A-G B-F-C-D-E-A-G B-C-D-F-E-A-G B-D-F-C-A-E-G.
Para realizar realizar un librería genómica usted debe repetir los mismos pasos que se discutieron en clase para realizar una genoteca de expresión, sólo que usted parte preferencialmente de DNA extracromosómico DNA foráneo de bacterias de interés DNA genómico DNA plasmídico.
En la construcción de librerías genómicas usted también debe utilizar fosfatasa alcalina para poder asegurar que la región reemplazable de los fagos, en este caso se una eficientemente con el DNA de interés Verdadero Falso.
El tratamiento con fosfatasa alcalina pretende evitar que los brazos de los fagos se unan entre sí, reduciendo la tasa de error en la construcción de las librerías genómicas Verdadero Falso.
El fago lambda gt11 es un fago artificial que tiene un gen que codifica para la Beta-Galactosidasa Verdadero Falso.
Si quiero insertar fragmentos de ADN muy grandes en fagos con tamaños promedio, yo puedo dejar el COS e insertar todo Verdadero Falso.
Un plásmido tiene un marcador de selección, un sitio de multiple clonaje y un sitio de origen Verdadero Falso.
Para promover la entrada de los plásmidos a las bacterias usted deberá hacer tratamientos Físicos con fosfatasa alcalina y DNAsa pancreatica bovina Químicos con ultrasonido Físicos con electroporación y alto voltaje Químicos con iones Magnesio para permeabilizar la membrana celular.
Una sonda en el contexto de biología molecular, es un DNA o una secuencia de DNA conocida que emite, generalmente una señal Verdadero Falso.
Dentro de los factores que pueden afectar la hidridación se encuentran Temperatura, anillaje y elongación de la cadena ph, sales y electroporación bases no complementarias Longitud del fragmento y cantidad de timina-adenina.
En un Sothern-Blot analizamos las cadenas de RNA sencillo y en un DOT-BLOT analizamos proteínas Verdadero Falso.
Un colony Blot se caracteriza por que en caja de petri se lisan células y se denatura el DNA para poder insertar las sondas Verdadero Falso.
Un DOT-BLOT se caracteriza por tener tanto DNA como RNA y evaluar las diferencias en varios nucleótidos Verdadero Falso.
En una hibridación las secuencias de DNA necesariamente deben ser complementarias Verdadero Falso.
La detección de las secuencias con similitud moderada o alta depende de lo estrictas que fueran las condiciones de hibridación aplicadas: si son de alto rigor, tales como temperatura de hibridación alta y alta salinidad de los tampones de hibridación, sólo permiten la hibridación entre ácidos nucleicos con secuencias muy similares, mientras que si son de baja severidad, como la reducción de la temperatura y la sal, la hibridación permite que las secuencias sean menos similares. Verdadero Falso.
De la caja de procesos por favor selecciones los pasos generales para poder llevar a cabo un proceso de hibridación estándar y ordenelos: 11-1-10-4-3-12-13 11-10-1-4-3-12-13 11-4-1-10-3-12-13 11-1-10-4-12-13-3.
Siempre hay que hibridar antes de denaturar para poder asegurar que en un Dot-Blot la sonda se una a la secuencia de la fase sólida Verdadero Falso.
Un DOT-BLOT se caracteriza por no requerir de una electroforesis o proteínas para poder hacer los análisis Verdadero Falso.
Sobre este procedimiento usted diría: Requiere de una fase líquida No requiere de electroforesis No analiza la expresión de genes Es más eficiente que una cromatografía de exclusión molecular.
Una diferencia entre el Nick Translation y los Hexámeros al azar es que en la primera se utiliza un fragmento klnow de la Polimerasa I de E. coli y el segundo se fundamenta en la generación de 3'OH libres que sintetizan a la derecha Verdadero Falso.
En el método de Nick Translation usted puede usar trazas de DNAsa pancreática bovina Verdadero Falso.
Sobre el método de Hexámeros al azar usted NO puede decir que Se generan primers al azar en las dos cadenas del DNA con las direcciones opuestas Se denaturan las cadenas y se obtienen sondas Se pueden formar cualesquiera combinaciones de sondas marcadas Se utiliza la actividad de la exonucleasa tipo I de E. coli.
Sobre el siguiente proceso usted puede decir que Se utilizó cDNA Se utilizó mRNA La expresión de NPM2 es mayor en riñon que en cerebro La expresión de NPM1 es mayor en Hígado que en embrión La expresión de NPM1 y NPM2 es similar en cerebro.
El Dot blot sólo puede confirmar la presencia o ausencia de una biomolécula o biomoléculas que pueden ser detectados por las sondas de ADN o el anticuerpo. Verdadero Falso.
No son características del Southern Blot Se hace clivaje de DNA Se sintetiza un cola de poliT La solución alcalina permite la denaturación de las hebras de DNA No se hace electroforesis Se hibrida con material radiactivo conocido Se aumenta la concentración de sales.
Son características de los Hexámeros al azar Se generan primers en las dos direcciones de las cadenas opuestas de ADN Se generan extremos 3' OH libres Se utiliza un Polimerasa I con actividad endonucleolítica Se forman 46 primers al azar.
Lo que usted marca en el nucletótido es: 5'-P 2-OH 3' OH La base nitrogenada.
Esta reacción es poco eficiente debido a que La enzima no es muy estable a temperaturas altas El luminol se degrada por causa de la DNA polimerasa Esta enzima es muy sensible a temperaturas bajas Esta enzima no es completamente afín al peroxido acoplado.
Esta reacción debe terminar Con una señal de indol positiva debido a la estabilidad de la fluoresceina Con una señal luminosa de debido al acoplamiento del luminol en la reacción con la peroxidasa En el desarrollo de resistencia En la utilización de lavados para poder poner leche de cabrba como sustrato afín a la fluoresceína.
¿Es necesario acoplar siempre con peroxidasa? Si No.
En secuenciación automática utilizamos 4 tubos distintos con varios dideoxinucletotidos para poder realizar la reacción de forma eficiente Verdadero Falso.
En la secuenciación se debe siempre o mínimo conocer la secuencia donde anilla el primer que yo quiero utilizar, en relación a ello Si no hay primer o secuencia conocida yo pueso romper el DNA y utilizar hexámeros al azar Yo puedo utilizar colas de poliA o poliC para acoplarlas al DNA desconocido y sintetizar las cadenas de DNA Yo puedo utilizar el método de traslación de la muesca con el cual obtengo una alta probabilidad de sintetizar sondas específicas de ese DNA de interés Dentro de los cuatro tubos nunca se va a sintetizar una secuencia de 3´P libres con las cadenas posibles.
Con el método de Sanger el rango permitido de secuenciación es de aproximadamente 1000 Kb 0.1*(10-3) Kb 1 Kb 0.1 Kb.
Una de las principales ventajas de la secuenciacón automática es que permite llegar a un análisis más objetivo y eficiente Verdadero Falso.
La secuenciación de Roche o Pirosecuenciación es un método de segunda generación Verdadero Falso.
Dadas las siguientes moléculas de ADN, es posible afirmar que: La temperatura de denaturación es mas alta para la molécula 2 La temperatura de denaturación es mas alta para la molécula 3 La temperatura de denaturación es igual para todas las moléculas La temperatura de denaturación es mas alta para la molécula 1.
Mientras corría un gel de electroforesis se fue la luz por unos minutos. Si quiero terminar de correr mi electroforesis, ¿cómo sabré cuanto más tiempo debo dejarla correr? Hasta que el frente de corrido desaparezca del gel. Cuando vea que la proteína de interés se haya separado de las demás proteínas Hasta que el frente de corrido dado por el azul de bromofenol avance una distancia determinada en el gel Hasta que el azul de bromofenol se difunda por todo el gel y tiña las proteínas.
Acoplé la enzima peroxidasa a un anticuerpo secundario para un ensayo de inmunoblot. El anticuerpo secundario es específico contra anticuerpos de conejo. ¿Luego de hacer el lavado del conjugado que no se unió al anticuerpo primario, qué debo añadir en el siguiente paso? El sustrato que reacciona con la enzima acoplada al anticuerpo primario Una enzima acoplada al anticuerpo primario de ratón, reconocido por el anticuerpo secundario El sustrato reconocido por la peroxidasa para producir un compuesto coloreado e insoluble Solución de leche descremada para bloquear la membrana de nitrocelulosa.
Si en una mezcla de proteínas se añade la solución tampón pero sin el SDS, bajo qué propiedad van a ser separadas las proteínas al correr la electroforesis: Forma Peso molecular Número de puentes de hidrógeno Carga neta y peso molecular.
La carga de una proteína esta conferida por: La sumatoria de la carga de los grupos R de sus amino ácidos El número total de posibles enlaces iónicos Nunca se sabe, muchas variables influyen en ella Su estructura terciaria.
La doble cadena de una molécula de ADN va a ser separada ¿Qué enzima de la maquinaria de replicación se utilizaría? DNA Polimerasa III Helicasa RNA Primasa Topoisomerasa.
Realicé un SDS-PAGE. La única proteína (proteína Y) contenida en la mezcla del pozo 1 presentó una migración de 6 cm, mientras que la misma proteína (proteína Y) presentó una migración de 5 cm dentro del pozo 2. ¿Qué puede explicar estos resultados? La solución tampón de la proteína Y del pozo 2 no tenía azul de bromofenol. La proteína Y en el pozo 1 fue incubada en un ambiente reductor mientras que la proteína en el pozo 2 no estuvo expuesta a ese tipo de ambiente. La proteína Y del pozo 1 no se le agregó anticuerpo primario. La proteína Y del pozo 2 fue expuesta a calentamiento mientras que la del pozo 1 no.
Se puede decir que la técnica de Inmunoblot: Es el primer paso en la detección de Ácidos Nucleicos. El segundo paso es la separación de las diferentes moléculas en una cromatografía de filtración en gel. Es una técnica dedicada a la detección específica de una proteína mediante la coloración con Azul de Coomassie. Es una técnica dedicada a la detección específica de una proteína mediante la unión específica del Anticuerpo secundario a la proteína de interés Es el segundo paso en la detección de una proteína en particular. El primer paso es la separación de las diferentes proteínas de acuerdo a su peso molecular.
La cromatografía de filtración en gel: Es la misma cromatografía de exclusión molecular, donde las moléculas son separadas de acuerdo a su peso molecular. Es la misma cromatografía de intercambio iónico, donde se utilizan soluciones de diferente fuerza iónica para liberar al ligando de las esferas. Es la misma cromatografía de exclusión molecular, donde las moléculas atraviesan esferas que contienen poros de muchos diámetros y éstas se encuentran dentro de una misma columna de cromatografía. Es la misma cromatografía de afinidad, donde el analito (ligando) puede ser retenido por un anticuerpo específico fijado en las esferas de la resina.
Un investigador tiene una mezcla de proteínas: (Proteína A: carga positiva y 1.2 KD; Proteína B: carga negativa y 1.3 KD). ¿Cuál de estos materiales elegiría si el investigador desea purificar la proteína A? Una columna con un límite de exclusión superior al tamaño de la proteína. Una columna con resina cargada positivamente. Una columna con resina cargada negativamente. Una columna con un límite de exclusión inferior al tamaño de la proteína.
¿Qué características tiene un nucleótido que conforma una cadena de ARN? Es una desoxiribosa con un OH en el carbono 2. Es una ribosa con un OH en el carbono 2. Es una ribosa con OH en el carbono 5 Es una desoxiribosa con OH en el carbono 5.
En la técnica SDS-PAGE las proteínas son convertidas a su estructura primaria en el momento de deshacer los (1) ______________ debido a la acción del (2) _____________ en la mezcla de reacción. (1) Radicales de los aminoácidos y (2) Agente Reductor (ej. DTT). (1) Enlaces disulfuro y (2) Agente Reductor (ej. DTT). (1) Enlaces disulfuro y (2) SDS. (1) Puentes de hidrógeno y (2) Azul de Coomassie.
Si trata de separar dos proteínas en un gel de SDS-PAGE, cuántas bandas observará al final de la electroforesis si una de estas proteínas estuviera conformada por 3 subunidades diferentes, y la otra por una sola subunidad. 4 bandas, una banda por la proteína que tiene una sola subunidad y tres por las de la otra proteína. 2 bandas, una por cada proteína separada. 2 bandas, en cada banda van a haber algunas subunidades de una u otra proteína. No se puede precisar, se debe conocer el peso molecular de cada subunidad proteica.
El paso necesario para el inicio de la Replicación es: La liberación de la tensión de los superenrollamientos en la doble hélice. La elongación de ambas cadenas hijas. El paso mediado por la DNA Polimerasa I. El reconocimiento del origen de replicación.
Cuál de las siguientes moléculas NO está involucrada en el proceso de traducción: Ribosomas RNA polimerasa mRNA tRNA.
De acuerdo con el código genético mostrado a continuación, determine la secuencia de aminoácidos que codifica la siguiente secuencia de DNA :
Hebra templado 5’ TAC GCA ATT CGT CAT GGA 3’
3’ ATG CGT TAA GCA GTA CCT 5’ Met-Thr-Asn-Cys-Val Tyr-Ala-Ile-Arg-His-Ala Met-Arg No se puede determinar con esta información.
Usted está tratando de clonar un fragmento de 1kb en el plásmido pGEM-13Zf (1500 pb), empleando la enzima HindIII en el proceso. Luego transforma dicho plásmido en la bacteria E. coli, sensible a la ampicilina (Amp). Determine cuál sería la electroforesis correspondiente al correr el producto de una clonación exitosa, luego de hacer una restricción con HindIII. Cómo debería ser las colonias correspondientes (Bacteria con el plásmido con el inserto)? a) Colonia azul, una sola banda de 1500 pb. b) Colonia azul, una sola banda de 3500pb. c) Colonia blanca, una sola banda de 1500pb d) Colonia blanca, una banda de 1500pb y una de 1000pb e) Colonia blanca, una sola banda de 3500pb.
Usted quiere observar el patrón de restricción de un plásmido circular, para lo cual extrae la molécula y la somete a digestión con tres enzimas diferentes: EcoRI que presenta 2 sitios de corte; HindIII, con 3 sitios de restricción; y PstI que no corta en ninguna posición. Si usted siembra en el pozo 1 la digestión del plásmido con las enzimas EcoRI y PstI; en el pozo 2 la restricción con PstI y HindIII; y en el pozo 3 la digestión con EcoRI y HindIII, ¿qué resultado esperaría observar al correr el gel de agarosa? a) En el pozo 1 se observan tres bandas, en el 2 dos bandas y en el 3 cinco bandas. b) En el pozo 1 se observan dos bandas, en el 2 tres bandas y en el 3 cinco bandas. c) En el pozo 1 y pozo 2 se observen dos bandas y en el pozo 3 tres bandas. d) Al someter el plásmido a restricciones múltiples, únicamente se va a observar un barrido debido a la degradación de la molécula. e) No se puede saber con la información dada.
Cuál de las siguientes afirmaciones sobre plásmidos como vectores de clonación es cierta: a) El plásmido no debe tener origen de replicación para prevenir que se generen muchas copias del mismo en una misma bacteria. b) El sitio de múltiple clonaje en los plásmidos como vectores de clonación se refiere al sitio del marcador de selección del plásmido. c) Tiene que tener más de un sitio de restricción para una misma enzima de restricción debido que esto incrementa la probabilidad de inserción del DNA foráneo en el plásmido. d) Si la bacteria que se va a transformar es sensible a la tetraciclina, es deseable que el marcador de selección que debería tener el plásmido confiera resistencia a la tetraciclina.
Si usted quisiera utilizar el plásmido pMK4 como vector de clonación, ¿qué enzima utilizaría para digerir tanto la secuencia a clonar como al plásmido mismo? (Ap: ampicilina) a) Taq 1 b) Hae III c) Hind III d) PstI.
Cuál de las siguientes afirmaciones es verdadera respecto al proceso ilustrado en la siguiente figura: a) Para la realización de la transcripción reversa se necesita una DNA polimerasa dependiente de RNA b) Se utiliza un primer poliA debido a que en el RNA mensajero existe secuencias repetitivas de poliT c) Para la realización de la transcripción reversa se necesita una RNA polimerasa dependiente de DNA d) La síntesis de la cadena de cDNA ocurre en dirección 3’-5’.
La diferencia entre genotecas de expresión y librerías genómicas es: a) Las genotecas de expresión se hacen en fagos y las librerías genómicas en plásmidos. b) Las librerías genómicas tienen sólo un tipo de inserto (todos los fragmentos de ADN son iguales) mientras que en las librerías de expresión son diferentes los insertos. c) Mientras las genotécas de expresión son colecciones de DNA codificante, las librerías genómicas son colecciones de DNA tanto codificante como no codificante. d) No hay diferencia. e) El vector de clonación que se usa.
El codón de inicio de la traducción (AUG) está justo al lado del 5’-CAP en el ARN mensajero, ayudando a que el ribosoma se una al ARN para iniciar el proceso. Verdadero Falso.
Un amigo suyo es abogado y le entrega la secuencia de una proteína polimórfica hallada en la escena de un crimen. Su amigo tiene varios sospechosos y necesita comparar la secuencia de ADN de cada uno de estos individuos con la correspondiente a la de la proteína para identificar al culpable. Él quiere que usted descifre la secuencia exacta de ADN a partir de la secuencia de amino ácidos para poder lograr ese objetivo. ¿Cuál es la respuesta más apropiada que le puede dar a su amigo? a. No puedo conocer la secuencia de nucleótidos porque desconozco cuál de las tres tripletas de parada utilizó el código genético para dispersar la maquinaria de traducción. b. No es posible conocer una única secuencia de nucleótidos y decir con toda seguridad que ella corresponde a la secuencia de la proteína aislada ya que más de un codón puede codificar para el mismo aminoácido. c. No hay problema, el código genético es universal, una secuencia de amino ácidos basta para conocer la secuencia de nucleótidos que codificó para la proteína recuperada. d. No se puede obtener la secuencia de nucleótidos porque la adición de amino ácidos es totalmente azarosa una vez el ribosoma reconoce el codón de inicio en el mRNA.
¿Qué caracteriza al tRNA del codón de parada? a. Hay tres opciones distintas de tRNA para el codón de parada, mientras que para el codón de inicio hay un solo tRNA disponible. b. Es un tRNA que aunque no codifica para ningún amino ácido, se aloja en el sitio A del ribosoma para evitar que la maquinaria de traducción se separe. c. El tRNA de parada es el mismo que el de inicio, carga el amino ácido Metionina que hace terminar el proceso de traducción. d. No existe un tRNA para el codón de parada (en todos los casos). Para los codones de parada hay una proteína de parada, similar a un tRNA que encaja allí y promueve la separación de los elementos de la traducción.
¿Qué está ocurriendo en esta gráfica? a. El operón lactosa permanece apagado porque la glucosa está presente en el medio, causando que el represor permanezca unido al promotor. b. El represor se desprendió del operador del operón lactosa por un cambio alostérico en su afinidad por la región operadora. c. La región promotora quedó disponible para que la RNA polimerasa se una. Gracias a la sola presencia de la lactosa se van a producir altísimos niveles de β-galactosidasa. d. Ya que glucosa y lactosa están presentes en el medio, no va a producirse mucha β-galactosidasa porque la RNA polimerasa se une fuertemente al promotor solo cuando la lactosa está ausente.
Usted tiene una cepa bacteriana de rápido crecimiento que contiene naturalmente el operón lactosa, la crece en dos tipos de medio de cultivo sin lactosa, uno con 10 unidades de IPTG (+IPTG) y otro sin IPTG (-IPTG). ¿Pasadas las 48 horas de crecimiento qué resultados espera observar? a. La bacteria del medio +IPTG dejó de producir β-galactosidasa ya que luego de que el IPTG ha sido degradado, la traducción de los genes del operón se ve interrumpida por el represor del promotor. b. La bacteria ha degradado el IPTG en el medio +IPTG, haciendo que el operón Lac se apague y deje de producir β-galactosidasa. c. La bacteria del medio –IPTG agotó todas sus fuentes de energía, activando la producción de la β-galactosidasa debido a la elevación de los niveles de cAMP. d. La bacteria crecida en el medio +IPTG continua produciendo β-galactosidasa porque el IPTG no puede ser degradado por esa enzima por lo que mantiene encendido el operón.
Quiero clonar un gen (en forma de cDNA) dentro del ADN del fago lambda, para poderlo expresar. El lugar donde puedo insertar el gen deseado está flanqueado por 2 sitios de restricción para EcoRI pero ése no es el caso para la secuencia alrededor del gen que quiero clonar. ¿Si usted quiere hacer lo que describe la gráfica, cuál es la solución que puede sugerir? a. Buscar un sitio de restricción para EcoRI dentro del gen que quiero clonar. b. Puedo colocar adaptadores (EcoRI linkers ó restriction site linkers) a ambos extremos del cDNA del gen. Estos adaptadores contienen la secuencia reconocida por la enzima. c. Tal vez pueda colocar un primer Oligo-dT durante la creación de la primera cadena de cDNA del gen. d. Buscar dos sitios fuera del gen que quiero clonar, uno corriente arriba y otro corriente abajo del gen, no importa que los sitios de restricción queden a miles de pares de bases de los extremos del gen.
¿Cuál es el orden correcto de los pasos en el proceso de rastreo de recombinantes utilizando sondas que se unen al clon de interés? a. Hibridación con la sonda, rompimiento del fago, placas de lisis, transferencia a filtro de nitrocelulosa, denaturación del ADN. b. Placas de lisis, transferencia a filtro de nitrocelulosa, rompimiento del fago, denaturación del ADN, hibridación con la sonda. c. Placas de lisis, denaturación del ADN, transferencia a filtro de nitrocelulosa, hibridación con la sonda, rompimiento del fago. d. Transferencia a filtro de nitrocelulosa, rompimiento del fago, placas de lisis, denaturación del ADN, hibridación con la sonda.
Nothern blot es una técnica que permite identificar la presencia de fragmentos de ADN en un fase sólida por medio de la hibridación de sondas marcadas. Falso Verdadero.
De acuerdo al proceso ilustrado en la siguiente figura, cuál de las siguientes afirmaciones es FALSA: a. La técnica es la reacción en cadena de la polimerasa b. La temperatura en la cual la DNA polimerasa elonga es igual a la temperatura de denaturación del DNA c. La temperatura de anillaje de los primers depende de la secuencia que constituye los primers d. El DNA se denatura a temperaturas elevadas debido a que permite el rompimiento de los puentes de hidrógeno entre al apareamiento de las bases nitrogenadas de cada cadena.
Un investigador secuencio un fragmento de ADN de un nuevo virus por medio de la metodología de Sanger, así como aparece en la siguiente figura. Por favor lea la secuencia que le dió 5' GAACTTGCGTA 3' 5´ GGATCCGCTAT 3´ 3´ GGTAACTGAAT 3' 5´GGTTAGTCTAGT3'.
Cuál de los siguientes reactivos no es necesario para el desarrollo de una PCR Tag polimerasa Enzimas de restricción MgCl2 Agua calidad molecular.
Para la realización de la técnica de RAPD es necesario el uso de primers específicos para el reconocimiento de secuencias conservadas dentro del genoma. Verdadero Falso.
Lo que distingue a un ddNTP (dideoxiribonucleotido trifosfato) de un dNTP (deoxinucleotido trifosfato) y un NTP (Ribonucleotido trifosfato) es: A. Un ddNTP tienen un OH’ en el Carbono número 1, mientras que un dNTP tiene un H’ en esa posición. B. Un dNTP y un NTP tienen en el Carbono número 3 un OH’, mientras que un ddNTP tiene un H’ en esa posición. C. Un ddNTP y un dNTP tienen en el Carbono número 3 un H’, mientras que un NTP tiene un OH’ en esa posición. D. Ninguna de las anteriores.
¿En qué ciclo de una reacción de PCR se comienzan a producir cadenas que van desde el extremo de un primer hasta el extremo del otro primer? A. En el ciclo 1. B. En el ciclo 2. C. En el ciclo 3. D. En el ciclo 4.
Es un punto importante en el paso de elongación en cada ciclo de la reacción de PCR: A. La Taq polimerasa debe elongar hasta el final de cada cadena para que la región que se amplifique contenga las secuencias donde anilla cada primer. B. La temperatura debe mantenerse a 96ºC para permitir que la Taq polimerasa elonge de manera óptima. C. El tiempo de duración del paso de elongación es bastante corto para evitar que la Taq polimerasa elongue secuencias que van más allá de la región de interés. D. Se mantiene una temperatura determinada para que los primers, añadidos en exceso, anillen únicamente con los productos del primer ciclo de la reacción.
Cuando usted divisa un gel de electroforesis con el resultado de la técnica de RAPD, observa un número determinado de fragmentos que indica: A. Todos los sitios donde el primer anilló en el templado de ADN. B. Los lugares donde el primer anilló a ambos extremos de una secuencia cualquiera, no más grande de 3000 pb. C. Los lugares donde el primer anilló a ambos extremos de una secuencia conocida de ADN. D. Todas las regiones del genoma en las que un organismo difiere de otro.
Para realizar un ensayo de AFLPs usted necesita: A. Conocer SIEMPRE la secuencia próxima al extremo 3’ de cada sitio de restricción. B. Tener un sitio de restricción a cada extremo de la secuencia de interés. C. Haber digerido el ADN genómico con una o más enzimas de restricción, durante el primer paso del ensayo. D. Correr un gel de poliacrilamida con los productos de la digestión del ADN genómico con una o más enzimas de restricción, para tomar cada fragmento de restricción y hacer un ensayo de PCR por separado.
¿Cuál es la secuencia que se produce en el método de secuenciación bajo la técnica Sanger? A. La secuencia templado, que es la que corre en el gel de electroforesis para conocer la secuencia deseada. B. Las secuencias complementarias, cuya longitud indica la posición de un nucleótido en la secuencia de interés. C. Las secuencias templado, cuya longitud indica la posición de un nucleótido en la secuencia de interés. D. Las secuencias complementarias, cuyo nucleótido de parada está ubicado en su extremo 5’.
Teniendo en cuenta que todos los individuos de una especie comparten un patrón común en la distribución de su genoma usted quiere ver algunas diferencias para poder clasificarlos para ello que proceso llevaría a cabo RFLP´S SOUTHERN BLOT HIBRIDACIÓN DE CADENAS SENCILLAS qPCR.
Sobre los polimorfismos es correcto decir que Son regiones de más de 4500 nt que no codifican para proteínas en el genoma de los mamíferos Son bandas de DNA que salen como ruido en una electroforesis Son características que son codificadas por DNA de diferentes fragmentos de diversa longitud Son fragmentos de DNA que tienen diferente longitud pero codifican para lo mismo.
Uno de los métodos más reproducibles a la hora de estudiar los polimorfismos de DNA es RADP´s ALFP´s RLFP´s Microarreglos.
Qué enzimas de restricción se utilizan en un método por RFLP´s Endonucleasas de TIPO I Exonucleasas de TIPO III Endonucleasas de TIPO II Endonucleasas de TIPO V.
Las enzimas de restricción corta en un sitio en particular Verdadero Falso.
Las mutaciones pueden ser por deleciones: alargamientos en las secuencias e inserciones acortamentos en las secuencias Verdadero Falso.
Usted cortó con enzimas de restricción un DNA genómico total de estos individuos de estudio para poder comparar sus patrones de bandeo e inferir diferencias. A este punto se pueden notar algunas diferencias pero ¿qué haría para poder comparar los patrones con más certeza? Hacer una PCR anidada de los productos obtenidos Diseñar primers e insterarlos al azar Hacer un qPCR Hacer una hibridación con sondas.
Para poder resolver el problemas de las manchas en los geles después de haber hecho la electroforesis usted puede Buscar el fragmmento con 50 nucleotidos Coger el fragmento, cortar y amplificar Hacer hibridaciones con primers al azar Hacer un Wetern Blot y analizar las diferencias.
La enfermedad de Huntigton es una enfrmedad autosómica en donde se sustituye un nucleótido en la pocisión dada que se encuentra asociada con la pérdida progresiva de la función mental. Por favor lea el gel e indique si este corresponde a una enfermedad autosómica recesiva, teniendo en cuenta que el ALFA A es el que está enfermo, ¿quién está enfermo entonces? AA No se puede saber Aa aa Puede haber más de un enfermo.
Por medio del uso de enzimas de restricción se pueden detectar cambios únicos en secuencias específicas en el DNA. Un ejemplo de dicha detección se puede asociar a la implementación de esta técnica para evidenciar cambios a nivel del genoma que se ven involucrados en enfermedades genéticas. A continuación aparece un gel correspondiente a la migración de un fragmento de DNA que se ha cortado con una enzima de restricción que reconoce la secuencia GTG, cambios en un solo nucleótido involucra cambios en el aminoácido codificante. De acuerdo con la información y la imagen determine cuál es el resultado de un individuo sano 1 2 1 y 2 No se puede saber con exactitud.
Ordene en orden cronológico los paso involucrados en la elaboración de la técnica de RFLP:
B- Transferencia a membrana
D- Comparación de patrones
C- Clivaje con enzimas de restricción
E- Auto radiografía
G- Electroforesis
F- Extracción de DNA
A- Incubación con sondas F-C-G-B-A-E-D A-B-E-F-G-C-D F-C-G-A-B-E-D F-G-C-B-A-E-D.
Indique por favor el proceso para realizar el DNA Fingerprinting en el orden cornológico:
B-Huella de ADN
C-Hibridación
D-Transferencia del DNA a la fase sólida
A-Corte y separación
E-Aislamiento de DNA E-A-D-C-B E-A-C-D-B E-A-D-C-B B-C-A-D-E.
Tanto en RFLP´s como en huellas de DNA se utilizan cocteles de sondas Verdadero Falso.
En RAPD´s se obtienen productos cuando un iniciador se une a secuencias complementarias en las cadenas opuestas de ADN y amplifica una sección corta limitada por las dos regiones de unión con el primer Verdadero Falso.
El método de RAPD´s no es muy poderoso porque no tiene información previa del genoma que se va a estudiar Verdadero Falso.
Debido a que el método de análisis de polimorfismos por RADP´s es netamente una PCR, con variaciones claro está, tiene sus limitantes una de ellas es Que no amplifica más de 500nt debido a que la polimerasa que se utiliza no sirve para nada Que se obtienen productos cuando un iniciador se anilla a los dos extremos de un mismo templado de DNA De todas maneras se necesita del corte con enzimas de restricción para poder ampliar el rango de resolución Que esta técnica es poco reproducible debido a los costos y ensayos múltples que deben hacerse.
Otra de las limitantes de un RAPD´s son las bandas ténues Verdadero Falso.
La digestión enzimática es el primer paso de un AFLP´s, en este sentido cuales son las endonucleasas de restricción más ampliamente utilizadas en este proceso EcoRI y MSETII EcoRIV y FatIII EcoRI y MseI EcoRIIn y MseV.
Cuántos nucleótidos reconoce la enzima de restricción EcoRI 4 6 10 8.
No es un paso del método de detección de polimorfismos por AFLP´s Poner adaptadores después de haber digerido el DNA Digerir primero el DNA Transferir a una fase sólida Agregar la Taq Polimerasa.
Si después de un clivaje con endonucleasas de restricción yo hago un gel y veo una banda usted que puede pensar Que la secuencia de DNA de interés sólo tenía un sitio de restricción posbile en un extremo Que se corto por dos extremos Que se corto por un sólo extremos Que el DNA es muy grande Que es un DNA mutante.
Cual es el rango de porcentaje en G+C estándar que se utiliza para hacer una replicación en RADP´s 45-50% 50-65% 55-70% 50-80%.
Con la información de la imagen "a priori" usted diría que estos individuos son iguales, si se le dice que esto es el resultado de un AFLP´s usted que podría hacer para poder confirmar este resultado Hacer un PCR+2,+2 Utilizar otros adpatadores Utilizar otras endonucleasas de restricción Hacer un RADP´s.
Cuantos nucleótidos o pares de bases posee el Genoma Humano 3000 billones de bases 3kpb 3000pb 3Mpb.
En qué año se empezó la puya por secuenciar el Genoma total del Homo sapiens sapiens 1985 1987 1999 2001.
Son marcadores que se utilizaron para el proyecto Genoma Humano (PGH) STS (Fragmentos de DNA de secuencia y posición conocida) EST (Fragmentos de DNA de secuencia, posición y expresión conocida) RFLP´s RADP´s AFLP´s ESP.
Para el proyecto Genoma Humano los cromosomas se rompen con enzimas de restricción Verdadero Falso.
El DNA debe ser clivado en varias partes pues para el proyecto Genoma Humano, la reacción de secuenciación tiene unos límites específicos Verdadero Falso.
La reconstrucción de las secuencias del DNA total del Genoma Humano se hizo a través de la YUXTAPOSICIÓN y ALINEAMIENTO Verdadero Falso.
Para poder realizar el exitoso proyecto genoma humano se requirieron librerías de expresión Verdadero Falso.
Los pasos generales que se siguieron para el PGH fueron Buscar fragmentos conocidos-Clivar-Clonar-Subclonar-Secuenciar-Alinear y armar Buscar fragmentos conocidos- Clivar-Clonar-Subclonar-Secuenciar-PCR Buscar fragmentos conocidos-Clivar-Clonar y guardar e hibridar Buscar fragmentos conocidos-Hacer PCR-Unir y alinear.
El porcentaje de DNA que codifica para proteínas es del 1.5% aproximadamente Verdadero Falso.
Para el proyecto Genoma Humano se requirió diseñar vectores pues los que convencionales no servían estos son YAC y BAC Verdadero Falso.
El rango de los BAC´s es de 500kb Verdadero Falso.
El rango de los YAC es de 1.5Mb Verdadero Falso.
Cual es el vector que mejor clona fragmentos pequeños Fago lambda Fago alfa Plásmidos YAC´s.
¿Qué porcentaje del genoma humano dirige la expresión de genes? 97% 3% 54% 45%.
Las regiones que no se pueden codificar del genoma humano se encuentran principalmente hacia los centrómeros Verdadero Falso.
Lo que anteriormente se denominada DNA basura ahora se ha asociado a procesos muy imoportantes a nivel biológico dentro de estos procesos podemos encontrar Promover las mutaciones Promover la expresión de otros genes Redundar el código genético Regular la expresión de los genes.
¿un microarreglo es una hibridación sencilla? Verdadero Falso.
En un microrreglo se construyen primero los primers? Falso Verdadero.
Sobre los microarreglos se puede decir que Sólo nos permite ver la expresión de un gen a la vez Permite ver muchas interacciones ntre los genes Permite ver la expresión diferencial de muchos genes Permite ver la expresión de genes específicos.
El grupo FOTOLABIL en un nucleótido o una molécula diana es sensible a la luz? Verdadero Falso.
Mientras estoy construyendo una sonda para un microarreglo olvidé poner poner la máscara que puede pasar Que todos los grupos que están en el chip se desprotejan y se unan al azar el material a hibridar Que todos los grupos se desprotejan diferencialmente mientras se unen las sondas al azar Que las sondas se unan al azar por complementariaedad de bases Que todos los grupos químicos se desprotejan diferencialmente y los nucleótidos se agreguen al azar.
Las distancias mínimas entre cadena y cadena en un chip de DNA no son críticas y permiten definir el peso de las muestras Verdadero Falso.
El tamaño de las sondas utilizadas para construir un microarreglo es de 20 a 25 nucleótidos en promedio Verdadero Falso.
Los controles de una hibridación siempre drán blanco HIBRIDACIÓN NULA Verdadero Falso.
Los controles de calidad sirven para eliminar los ruidos Verdadero Falso.
De acuerdo a la imagen, si quiero analizar expresión de genes yo debo Clonar primero que todo en vectores Construir primero con el material que quiero analizar Escanear la información Sintetizar el RNA en cDNA.
El DNA que quiero hibridar en microarreglos se debe anclar a un anticuerpo marcado con biotina Verdadero Falso.
Cuando enfrento dos materiales genéticos en un chip de DNA yo obtendré que "a priori" la condición que se expresa más es la condición de referencia falso Verdadero.
Para poder cuantificar la expresión de un gen con un chip de DNA yo utilizo un transiluminador U.V Verdadero falso.
El convenio de lectura de los colores en un chip de DNA es Negro-MAXIMA EXP. Blanc-COMBINACIÓN DE LA MUESTRA PROBL Y LA REF. Amarillo-Emisión mínima VERDE-MUESTRA REF.
La expresión nula de un gen-COLOR NEGRO se refiere a controles de calidad con sondas mutadas Verdadero Falso.
La bioinformática se articula a las matemáticas Verdadero Falso.
El objetivo de la bioinformática es organizar, procesar y archivar la información biológica Verdadero Falso.
45% de las secuencias del DNA total del genoma humano son secuencias repetitivas Verdadero Falso.
Un SNP o polimorfismos mononucleotídicos se repiten o presentan cada 1500pb aprox. Verdadero Falso.
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