BM T5a - Prod. de extracción y purificación de a.nucleicos

La manipulación de los ácidos nucleicos varía según el tipo de organismo o el tejido del que se quiere obtener un conjunto de células aisladas. Verdadero. Falso.

Durante la extracción de ácidos nucleicos se mantendrá una correcta calidad y seguridad para evitar la contaminación y degradación de las muestras procedentes de tejidos vegetales o animales, sangre, microorganismos e hisopos nasales, entre otros. Verdadero. Falso.

Etapas de extracción y purificación de los ácidos nucleicos. Aislamiento celular, extracción, purificación, control de calidad y aplicación de la técnica deseada. Aislamiento celular, extracción, desinfección y control de calidad. Aislamiento celular, extracción, desinfección, control de calidad y aplicación de la técnica deseada. Aislamiento celular, extracción, desinfección y aplicación de la técnica deseada.

El pre-tratamiento de las muestras, es el proceso de obtención de células libres en disolución a partir de un tejido u organismo. Este proceso puede ser químico o mecánico. Aislamiento celular. Extracción. Purificación. Control de calidad.

Las técnicas para realizar el aislamiento células dependerán de la muestra de partida: Muestras procedentes de organismos procariotas. Al usar hisopos para obtener células de epitelio nasal o bucal y extraer los ANs. Cuando se trabaja con células eucariotas.

Orden de las fases necesarias para una correcta extracción de muestras: Purificación Extracción Aislamiento_celular Aplicación_de_la_técnica_deseada Control_de_calidad.

Pretratamientos más habituales en la obtención de suspensiones celulares de organismos eucariotas. Tejidos animales y vegetales. Sangre. Cultivos celulares. Tejidos minerales. Fluidos corporales.

Requieren de una homogeneización mecánica y química previa. Aislamiento de células en los tejidos animales y vegetales. Aislamiento celular de la sangre. Para los cultivos en suspensión. Cultivos de monocapa.

Se separa las células con trituradoras automáticas o morteros hasta conseguir una suspensión de células separadas, pero manteniendo sus membranas y estructuras intracelulares intactas. Homogeneización mecánica. Homogeneización química. Homogeneización física. Cultivo celular.

Mediante las proteasas se disgregan las células de los tejidos. Si las células que se desean extraer forman parte de un órgano, debe realizarse una disección previa del órgano. Homogeneización mecánica. Homogeneización química. Homogeneización física. Cultivo celular.

La homogeneización se realiza a temperaturas altas para evitar que ciertas enzimas degraden el ADN o ARN. Verdadero. Falso.

En los laboratorios de anatomía patológica los tejidos animales se conservan en: parafinas. alcoholes. cetonas. xilol.

En los laboratorios de anatomía patológica si se desea obtener los ácidos nucleicos de los tejidos animales, se realizará un pretratamiento con disolventes desparafinantes como: parafinas. alcoholes. cetonas. xilol.

La homogeneización de tejidos suele combinar las técnicas mecánicas con las químicas en el mismo tubo de reacción, favoreciendo la liberación de las células del tejido y alarga los tiempos del pretratamiento. Verdadero. Falso.

Se realizará 6h antes de la extracción de ADN. Si no es así, se conservará a 4ºC y se utilizará antes de 5 días. Aislamiento de células en los tejidos animales y vegetales. Aislamiento celular de la sangre. Para los cultivos en suspensión. Cultivos de monocapa.

En el aislamiento celular de la sangre. La sangre se obtendrá en tubos con EDTA para evitar la coagulación. La sangre se obtendrá en tubos con sulfato de aluminio para evitar la coagulación. La sangre se obtendrá en tubos con cloruro férrico para evitar la coagulación. La sangre se obtendrá en tubos con EPO para evitar la coagulación.

De todos los componentes de la sangre, solamente quienes contienen ácidos nucleicos. leucocitos. hematies. plaquetas. plasma.

Pasos para obtener los leucocitos de la sangre: Obtención_de_los_leucocitos_de_la_interfase Centrifugación_de_la_sangre_durante_30_min_a_400_x_g Agregación_de_eritrocitos_por_medio_Ficoll-PaqueTM Extracción_de_sangre_en_tubos_EDTA_al_10%.

Proceso que permite liberar al medio a los ácidos nucleicos, eliminando el resto de componentes células que los mantenían protegidos. Se obtendrá 1 solución homogénea con el ADN o ARN intacto junto con el resto de lisado celular. Aislamiento celular. Extracción. Purificación. Control de calidad.

Para extraer el ADN o ARN, se realizará un proceso de _____________ por el que se destruyen todos los componentes celulares menos los ácidos nucleicos. Este proceso va ligado a la inactivación de las nucleasas.

Estas enzimas se encuentran libres en los tejidos y en el citoplasma, por lo que la lisis celular, sin su inactivación degradaría los ácidos nucleicos. Por eso, se utilizan agentes bloqueantes de la actividad de estas enzimas en la solución de lisis o extracción. nucleasas. amino transaminasas. proteasas. sacarasas.

Es un líquido formado por varios ingredientes que tienen como función la lisis de los componentes cels e inactivan las ADNasas o ARNasas. tampón de extracción. plasma. suero. tampón de inserción.

Los componentes comunes del tampón de extracción son: Detergente. Proteasas. Agentes quelantes. Agentes caotrópicos.

Relaciona los componentes comunes del tampón de extracción con un ejemplo: Detergente. Proteasas. Agentes quelantes. Agentes caotrópicos.

Los ingredientes del tampón de extracción necesarios para extraer ADN de células con pared son: Detergente, proteasas, agentes quelantes y agentes caotrópicos. Verdadero. Falso.

Cuando se utilizará de Detergente CTAB como ingrediente del tampón de extracción: Siempre. Nunca. Células con pared celular. Células sin pared celular.

Cuando se utilizará lisozimas o liticasas como ingrediente del tampón de extracción: Siempre. Nunca. Células con pared celular. Células sin pared celular.

Relaciona su función. Detergente CTAB. Lisozimas o liticasas.

Tienen pared celular o membranas ricas en polisacáridos. bacterias. hongos. células vegetales. células animales.

En la extracción de ADN se suelen añadir al tampón de extracción diferentes tipos de ARNasas cuando se necesita eliminar el ARN de las células para evitar interacciones en la fase de purificación del ADN. Verdadero. Falso.

Cuando se requiere extraer ARN, se añaden ADNasas al tampón de extracción, ya que se realiza una purificación específica para ARN. Verdadero. Falso.

Es falso en cuanto a la extracción de ARN. está teniendo un aumento exponencial debido al alto número de técnicas (secuenciales de ARN, microarrays). la técnicas de extracción buscan medir la expresión génica total y descubrir nuevos tipos de micro-ARN. se suelen añadir al tampón de extracción ARNasas. no se añaden ADNasas al tampón de extracción, ya que se realiza una purificación específica para ARN.

Tras aislar las células de un tejido y extraer los ácidos nucleicos, se obtiene un lisado celular, donde estarán los ácidos nucleicos intactos y rodeados de la suspensión del resto de componentes celulares. Verdadero. Falso.

Para separar los ácidos nucleicos del lisado celular se utiliza algún método de purificación. Se usarán nuevos reactivos y centrifugaciones durante cada paso del proceso de purificación. Verdadero. Falso.

No confundir. Extracción. Purificación.

Extracción: separación del ADN o ARN, lípidos, proteínas, sales y otras sustancias obtenidas en el proceso de purificación. Verdadero. Falso.

Relaciona los siguientes métodos de purificación. Purificación de ADNg. Purificación de ADN plasmídico. Purificación de ARN.

Los reactivos necesarios en la mayoría de procesos de purificación. Detergente. Proteasas. Agentes quelantes. Agentes caotrópicos. Acetato sódico. Cloroformo isoamílico. Etanol al 100%. Etanol al 70%. Isopropanol. Tampón de hidratación.

Los componentes comunes del tampón de extracción son: Detergente. Proteasas. Agentes quelantes. Agentes caotrópicos. Acetato sódico. Cloroformo isoamílico. Etanol al 100%. Etanol al 70%. Isopropanol. Tampón de hidratación.

Relaciona los reactivos necesarios en la mayoría de procesos de purificación. Acetato sódico. Agentes caotrópicos. Cloroformo isoamílico. Etanol al 100%. Etanol al 70%. Isopropanol. Tampón de hidratación.

Ordene las fases de purificación del ADN. Precipitación_de_ADN Eliminación_o_precipitación_de_proteínas_y_lípidos Hidratación_y_conservación_de_ADN Lavado_de_ADN.

Pasos del proceso de purificación del ADN por salting-out. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.

Pasos del proceso de purificación del ADN por solventes orgánicos a partir del extracto celular: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10.

Relaciona: Pellet. Sobrante.

La purificación de ADNg por columnas de adsorción se basa en la adsorción por afinidad química de los ácidos nucleicos a una columna, en presencia de sales caotrópicas que generan un ambiente hidrofóbico. Verdadero. Falso.

El proceso de cromatografía de purificación de ADNg por columnas de adsorción utiliza membranas recubiertas de sílice o de lana de vidrio que se localizan dentro de tubos de plástico, que se acoplan con tubos de tipo Eppendorf. Verdadero. Falso.

Pasos para la purificación de ADNg por columnas de absorción: 1. 2. 3.

La purificación de ADNg por columnas de absorción se puede utilizar para purificar: ADN. ARN. ADN o ARN. Extracto celular.

Plásmido: ADN circular de pequeño tamaño en algunos virus. Verdadero. Falso.

En la purificación de ADN plasmídico, la purificación de este pequeño tipo de ADN bacteriano es ampliamente utilizada en los laboratorios: genéticos y microbiológicos. científicos, genéticos y microbiológicos. microbiológicos. genéticos y químicos.

La técnica más usada para la purificación de ADN plasmídico. lisis alcalina. salting-out. solventes orgánicos. columnas de absorción.

La purificación de ADN plasmídico por lisis alcalina se estructura en tres pasos: 1. 2. 3.

Proceso de purificación de ADN plasmídico x lisis alcalina. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Último.

El ARN se puede extraer de: bacterias, virus y células eucariotas. cualquier organismo. células eucariotas y procariotas. bacteria y virus.

Cuando se trabaja con virus y bacterias se puede purificar el ARN total (conjunto de todos los tipos de ARN) o el ARNm (por su cola poliA usando sondas específicas). Verdadero. Falso.

En la purificación de ARN es imprescindible evitar la acción de las ADNasas: todos los protocolos tienen de objetivo principal la inactivación rápida de estas enzimas. Verdadero. Falso.

En el proceso de purificación del ARN se utiliza un agente __________ (tiocinato de guanidino y fenol): provoca el lisado de células y la inactivación de las ARNasas.

¿Qué se añade en el proceso de purificación del ARN para generar una fase orgánica (lípidos y proteinas desnaturalizadas) y una fase acuosa con el ARN en suspensión?.

El proceso de purificación del ARN total de células eucariotas se divide en 7 pasos según el protocolo: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.

Sistemas automáticos de purificación: Equipos que realizan de manera automatizada el aislamiento celular, la extracción y la purificación. Robots que, junto con el uso de kits, realizan estos procesos de manera autónoma. Se suelen encontrar en hospitales o centros privados con un alto volumen de muestras biológicas a analizar. Verdadero. Falso.

Ventajas de los sistemas automáticos de purificación. Más rápidos y eficientes con alto número de muestras. Mayor rendimiento y reproducibilidad de los análisis. Evita la contaminación introducida x el técnico. Alta calidad de purificación de los ácidos nucleicos. Más económicos. Menos normas de seguridad y asepsia.

Cuando se realiza la extracción y la purificación del ADN (aún + imp si se trabaja con ARN), se debe trabajar bajo estrictas normas de seguridad y asepsia: Uso de guantes. Cabina de flujo laminar. Limpia las superficies con etanol. Todos los reactivos y materiales usados deben estar certificados como libre de nucleasas.

Realizada la extracción y purificación de los ANs, se debe analizar la muestra comprobando: no ha sido degradada por nucleasas. si la concentración de ADN o ARN obtenida es suficiente. si existen contaminantes (proteínas o carbohidratos) que puedan interferir en los estudios. no ha sido degradada por lipasas.

Para evaluar la calidad de la muestra obtenida después de la purificación se hacen pruebas. manuales y automatizadas. manuales o automatizadas. manuales. automatizadas.

Parámetros que se tienen en cuanta para evaluar la calidad de las muestras obtenidas después de la purificación: Integridad. Concentración. Pureza. Cantidad. Calidad. Conservación, atendiendo a las características individuales que presenta cada tipo de ácido nucleico.

Indica el grado de degradación de los ácidos nucleicos. Integridad. Concentración. Pureza. Conservación.

Se usas técnicas cuantitativas, usando el parámetro físico de la absorbancia: Integridad. Concentración. Pureza. Conservación.

Determina la relación del ADN o ARN con proteínas y polisacáridos, y la observación de si estos contaminan la muestra. Por tanto, determina la ausencia de contaminación. Integridad. Concentración. Pureza. Conservación.

El estudio de la integridad se analiza con técnicas cualitativas como la _____________________, que permite visualizar varias muestras en un único gel a la vez que se obtiene el grado de degradación.

Para medir la integridad del ADNg se utilizan geles de agarosa al. 0,8%. 0,9%. 1,5%. 0,5%.

Si la extracción y la purificación han ido bien, al medir la integridad del ADNg se observa en la calle o carril dos bandas claramente definidas en la parte superior del gel. Verdadero. Falso.

Si la extracción y la purificación no se ha hecho bien y hay degradación, al medir la integridad del ADNg se observa en la calle o carril. dos bandas claramente definidas en la parte superior del gel. una única banda claramente definida en la parte superior del gel. una estela a lo largo del carril.

Análisis de la integridad del ADNg. 1. 2. 3.

¿Qué nombre recibe la estela a lo largo del carril cuando existe degradación del ADNg?.

Análisis de la integridad del ARN total. 1. 2. 3.

Para medir la integridad del ARN total en eucariotas se usa: gel de agarosa o poliacrilamida. gel de agarosa. hidrogeles y organogeles. hidrogeles nanocompuestos.

ARN total está compuesto por: ARNr (80%-85%). ARNt (10%). ARNm (2-5%). ADN pol III (1,5%). ARN pol I (1,5%).

Para obtener buenos resultados de integridad en el estudio del ARN total eucariota, se deben observar 2 o 3 bandas definidas que corresponden a los 4 tipos de ARNr en eucariotas. Verdadero. Falso.

Para obtener buenos resultados de integridad en el estudio del ARN total eucariota, se deben observar 2 o 3 bandas definidas que corresponden a los 4 tipos de ARNr en eucariotas y a los ARNt: Banda superior. Banda intermedia. Banda inferior.

Es cierto en cuanto al buen resultado de estudio de integridad del ARN total eucariota. Se deben observar 2 o tres bandas definidas que corresponden a los 4 tipos de ARNr en eucariotas y a los ARNt (superior, intermedia e inferior). Normalmente se observan 2 bandas: la superior y la intermedia. Se debe visualizar a lo largo del carril una smear que representará los diferentes tamaños del ARNm. Se observará un ligero smear pero sin presencia de las 3 bandas del ARNr y el ARNt.

Pero si el ARN está degradado, se observará un ligero smear pero sin presencia de las 3 bandas del ARNr y el ARNt. Verdadero. Falso.

El marcador de pesos moleculares en el estudio de integridad del ARN total es un patrón de bandas de tamaños conocidos que determina el peso / longitud de las bandas de cada carril. Verdadero. Falso.

La concentración de de las muestras se mide por la absorbancia, que relaciona la concentración de una molécula (ADN o ARN) en solución con la cantidad de luz reflejada por dicha molécula. Verdadero. Falso.

La concentración de de las muestras se mide con: equipos de espectrofotometría, como el Nandrop. refractómetros como el Abbe. refractómetros de proceso Vaisala Polaris. Equipos Kem.

El pico de absorción de luz de los ácidos nucleicos es. 260 nm. 250 nm. 200 nm. 240 nm.

Para ADNds bicatenarios: se debe multiplicar la absorbancia obtenida del espectrofotómetro (A260) por factor de conversión (50 µ/mL) y, si se ha realizado una dilución previa, x el factor de dilución. Verdadero. Falso.

Cuál es el factor de conversión para ADNss. 30 µg/mL. 40 µg/mL. 50 µ/mL. 20 µ/mL.

Cuál es el factor de conversión para ADNds. 30 µg/mL. 40 µg/mL. 50 µ/mL. 20 µ/mL.

Cuál es el factor de conversión para ARN. 30 µg/mL. 40 µg/mL. 50 µ/mL. 20 µ/mL.

Para analizar la absorbancia del medio en el que disuelve el ácido nucleico (tampón de hidratación), cuya absorbancia se mide en 320 nm. Por ello, para tener medidas precisas se debe sumar esta absorbancia a la de 260 nm. Verdadero. Falso.

Concentración ADNds =. (A260 - A320) × 50 µg/mL x factor de dilución. (A260 - A320) x 30 µg/mL x factor de dilución. (A260 - A320) × 40 µg/mL x factor de dilución. (A260 - A320) × 20 µg/mL x factor de dilución.

Concentración ADNss =. (A260 - A320) × 50 µg/mL x factor de dilución. (A260 - A320) x 30 µg/mL x factor de dilución. (A260 - A320) × 40 µg/mL x factor de dilución. (A260 - A320) × 20 µg/mL x factor de dilución.

Concentración ARN =. (A260 - A320) × 50 µg/mL x factor de dilución. (A260 - A320) x 30 µg/mL x factor de dilución. (A260 - A320) × 40 µg/mL x factor de dilución. (A260 - A320) × 20 µg/mL x factor de dilución.

Siempre que se analizan muestras con el espectrofotómetro, se debe medir antes la solución donde está disuelto nuestro analito (a esta medida se le conoce como el negro) y se debe restar siempre a la absorbancia del analito. Verdadero. Falso.

Determina la relación del ADN o ARN con proteínas y polisacáridos, y la observación de si estos contaminan la muestra. Por tanto, determina la ausencia de contaminación. Concentración. Pureza. Conservación. Integridad.

Relación de pureza del ADN versus proteína. Valor entre 1,7 y 2. Valor < 1,65. Valor > 2,1.

Relación de pureza del ARN versus proteína. Valor entre 1,8 y 2,1. Valor < 1,7. Valor > 2,2.

Relación de pureza del ADN o ARN versus polisacáridos. Valor entre 1,5 y 2,2. Valor < 1,4. Valor > 2,3.

Se usa la ___________ para medir la presencia o ausencia de prots o polisacáridos en la muestra recién extraída.

Para evaluar la pureza se deben medir previamente la absorbancia del ácido nucleico (260 nm) y comprobar su relación con la cantidad de luz absorbida por proteínas (280 nm) o carbohidratos (230 nm). Al igual que la concentración, también debe restar la medición de 320 nm a cada una de las medidas (muestra de referencia). Verdadero. Falso.

Es cierto en cuanto a la conservación de los ácidos nucleicos. Tras obtener los ácidos nucleicos y comprobar su calidad, se suele almacenar una parte (alícuota) del contenido de la muestra para estudios posteriores. El objetivo es mantener las condiciones de viabilidad e integridad de dichas moléculas y evitar degradaciones durante largos periodos de tiempo. Se almacenan en tubos libres de nucleasas y se disuelven en tampones de conservación (bajos en sales) con sustancias crioprotectoras (alcoholes). Cuando se trabaja con muchas muestras, es fácil equivocarse si no existe una buena trazabilidad en el almacenamiento. Por esto se identificarán todas las muestras con etiquetas y llevar un estricto control informatizado de estas. Determina la ausencia de contaminación. Indica el grado de degradación de los ácidos nucleicos.

El ADN se conservará a: 4º C. -20º C. -80º C.

El ADN (altamente inestable y de fácil degradación) se almacena directamente a -20°C (para cortos periodos de tiempo) o a -80°C (para largos tiempos de conservación). Verdadero. Falso.

Cuando se trabaja con muchas muestras, es fácil equivocarse si no existe una buena trazabilidad en el almacenamiento. Por esto se identificarán todas las muestras con etiquetas y llevar un estricto control informatizado de estas. Métodos para garantizar la trazabilidad de las muestras: Rotular con tinta resistente a bajas Tº y a solventes orgánicos. Utilizar etiquetas resistentes a bajas temperaturas o grabados en códigos de barras cuando se trabaje con un alto volumen de muestras. Usar codificación 2D para identificar con escáneres las diferentes muestras y garantizar la protección de los datos del paciente. Utilizar tinta de color rojo para poder visualizar rápidamente lo datos de la muestra.

Relaciona las formulas correspondientes: ADN vs proteína. ARN vs proteína. ADN vs polisacáridos. ARN vs polisacáridos.

La ___________ contenida en los hematíes es un potente inhibidor de la PCR y se eliminará durante el pretratamiento de la sangre.