BMC 5

¿Cuál es la diferencia entre la PCR convencional y la PCR a tiempo real?. La PCR a tiempo real permite la cuantificación del ADN amplificado. La PCR a tiempo real no requiere el uso de cebadores lo que facilita la técnica. La PCR a tiempo real permite la amplificación de las secuencias de ARN. La PCR a tiempo real no requiere tiempos de espera.

En una PCR cuantitativa para el estudio de expresión génica, si una muestra tiene menor Ct que un control quiere decir que hay: Infraexpesión de ese gen. soobreexpresión de ese gen. silenciamiento de un gen normalmente expresado. expresión de un gen normalmente silenciado.

En la Hot Start PCR (inicio en caliente): Se emplean tiempos de desnaturalización más prolongados que en la PCR convencional. Se suministra la polimerasa de forma inactiva. Se emplean cebadores con una Tm elevada. La primera fase requiere Tª superiores a los 100ºC.

En el ciclo 5 de la PCR el número de amplicones que se generan es: 10. 32. 20. 22.

RT-PCR indica PCR a tiempo real. ¿Verdadero o falso?. verdadero. falso.

Indica la respuesta que corresponde al uso de sondas Taqman para realizar una PCR a tiempo real: La sonda tiene forma de horquilla por complementariedad de sus extremos. La fluorescencia se detecta cuando la ADN polimerasa hidroliza la sonda. Son parejas de sondas que hibridan en regiones adyacentes del amplicón. La fluorescencia se detecta cuando la sonda se intercalar en el ADN.

Respecto a los geles de poliacrilamida indica la respuesta correcta: Se utilizan para separar fragmentos de menor tamaño que los geles de agarosa. Tienen menor poder de resolución que los geles de agarosa. Las moléculas mas grandes migrarán más. Ninguna respuesta es correcta.

En la PCR a tiempo real: es una técnica a punto final. La Ct es inversamente proporcional al nº de copias inicial de la muestra. Con sondas beacons la fluorescencia se mide al final de la fase de extensión. La zona de meseta constituye la primera fase y representa la fase de mayor rendimiento.

En la PCR a tiempo real, la fase en la que se detecta la fluorescencia de fondo en cada tubo se denomina: fase decrecimiento exponencial. fase de amplificación. fase de meseta. fase de ruido.

¿Cuál es la función del bromuro de etidio en la electroforesis en gel de agarosa?. Se intercala en el ADN lo que nos permite la posición de ese fragmento en el gel al iluminarlo con luz ultravioleta. Su concentración determina el tamaño del poro de los geles de agarosa. Es el colorante que nos permite ver el frente de la electroforesis y así poder pararla cuando queramos. Actúa como agente gelificante de la agarosa, dando una mayor consistencia al gel.

¿Qué es cierto en relación a la técnica de electroforesis del ADN?. La distancia recorrida por los fragmentos es directamente proporcional a su tamaño. Las moléculas de ADN en solución tienen una carga neta negativa. Si quiero separar dos fragmentos de 180 y 186 pares de bases deberé utilizar un gel de agarosa. Las moléculas de ADN migrarán hacia el cátodo.

En la detección de fragmentos de ADN por colorantes fluorescentes: El bromuro de etidio se intercala entre los grupos fosfato de ADN y ARN. El bromuro de etidio emite fluorescencia cuando se expone a luz en el rango del espectro visible. El bromuro de etidio se visualiza con luz UV a una longitud de onda de 420-466nm. El bromuro de etidio se intercala entre las bases nitrogenadas de ADN y ARN.

RT-PCR indica PCR a tiempo real. ¿Verdadero o falso?. verdadero. falso.

Elige la respuesta correcta sobre la PCR a tiempo real cuando se utilizan agentes intercalantes: La fluorescencia aumenta con el número de ciclos. La fluorescencia se mide al final de la fase de hibridación. ninguna es correcta. Se excita el quencher y se mide la fluorescencia emitida por el notificador.

¿Qué es un RFLP?. Un fragmento de longitud variable producido tras la digestión con una enzima de restricción. Una secuencia diana de una enzima de restricción. Una mutación en el ADN que cambia una diana de restricción. Un tipo de polimorfismo de locus único SNP.

¿Qué es cierto en relación a las mutaciones dinámicas?. Son expansiones repetitivas de tripletes. Se pueden mover a lo largo de la secuencia de ADN cambiando su posición. Todas contienen un gran número de citosinas metiladas. Son mutaciones que desaparecen a lo largo de la vida.

¿Qué es verdad en relación a las mutaciones del ADN?. Un cambio del tipo de base es más peligroso que la inserción de una base. La sustitución de una purina por otra es una transición. Si un cambio de una base por otra no cambia el marco de lectura no puede considerarse una mutación. Las mutaciones puntuales implican siempre un cambio de un aminoácido.

¿Cuál es la función del bromuro de etidio en la electroforesis en gel de agarosa?. Es el colorante que nos permite ver el frente de la electroforesis y así poder pararla cuando queramos. Su concentración determina el tamaño del poro de los geles de agarosa. Se intercala en el ADN lo que nos permite la posición de ese fragmento en el gel al iluminarlo con luz ultravioleta. Actúa como agente gelificante de la agarosa, dando una mayor consistencia al gel.

Si en una PCR observas la presencia de bandas inespecíficas, indica cuáles de estas acciones realizarías para evitar su formación. Ajustar la concentración de nucleótidos. Varíar la concentración de cloruro de magnesio. Disminuir la temperatura de annealing. Aumentar la temperatura de annealing.

Respecto al ciclo básico de una PCR señala la respuesta correcta: El tiempo de extensión es independiente de la velocidad de polimerización. Los cuatro dNTPs deben añadirse en la misma proporción a la mezcla de reacción. Temperaturas de hibridación más bajas que la Tm de los cebadores se pueden traducir en un menor rendimiento de la hibridación. El Mg2+ es un cofactor necesario de los dNTP, que necesitan una concentración optima para su buen funcionamiento.

En relación con las ADN polimerasas usadas en una PCR, señala la respuesta correcta: Catalizan la incorporación de nucleótidos en dirección 5’-3’. Realizan su actividad polimerasa a una Ta óptima comprendida entre 85 y 95oC. Se aíslan de arqueobacterias halófilas que son organismos procariotas capaces de sobrevivir a temperaturas superiores a 45oC. Las que tienen actividad exonucleasa 5’-3’, son capaces de eliminar errores.

¿Qué función realiza el cloruro de magnesio en la técnica de PCR?. inhibe alas ADNnasas. evita que los cebadores hibriden entre ellos. estabiliza las cadenas de ADN. aumenta especificidad de la amplificación.

Respecto a los geles de poliacrilamida indica la respuesta correcta: Tienen menor poder de resolución que los geles de agarosa. Se utilizan para separar fragmentos de menor tamaño que los geles de agarosa. ninguna es correcta. las moléculas mas grandes migrarán más.

El SyberGreen es: Un agente intercalante de la doble hélice de ADN que se une de forma específica. Un agente intercalante de la doble hélice que se une de forma inespecífica. Un fluoróforo que se une a los cebadores. Un quencher que se usa en las sondas de hidrólisis.

Utiliza dos pares de cebadores, externos e internos para aumentar la sensibilidad: Nested- PCR. Hot Start PCR. Multiplex PCR. qRT-PCR.

Se realiza para evitar la incorporación de mutaciones puntuales: PCR en caliente. PCR de grandes fragmentos. PCR amidada. PCR de alta fidelidad.

¿Qué ocurre en la técnica de PCR durante la fase de annealing?. se hibirdan los primers. se inhibe la ADN polimerasa. se desnaturalizan las cadenas de ADN. se plomeriza el ADN.

Preparamos una PCR con un volumen final de reacción de 50 ?l y 1 ?l de ADN molde. Si necesitamos añadir 1,25 U/ 50?l de Taq polimerasa que tiene una concentración stock de 2,5U/?l, ¿qué volumen debemos añadir a cada tubo?. 1,5 L. 5L. 2l. 0,5L.

Para aumentar la especificidad de la PCR. Usamos cebadores con Tm diferentes. Utilizamos una polimerasa con capacidad retro-transcriptasa. Utilizamos cebadores con menos de 16 b. Ponemos una Ta de hibridación superior a la Tm de los cebadores.

¿a que llamamos colorante de carga en una electroforesis?. al colorante que utilizamos para teñir el gel tras la electroforesis. al colorante azul de bromofenol o xilencianol. ninguna es correctas. al bromuro de etidio.