FIB 25/26 Preguntas alumnos II

¿Cuál es una diferencia clave en el tratamiento inicial de la muestra entre el Southern Blot y el Northern Blot?. a. En el Northern Blot se utilizan enzimas de restricción para fragmentar el ARN, mientras que en el Southern Blot se emplea formamida. b. Ambos reciben exactamente el mismo tratamiento inicial, ya que ADN y ARN tienen la misma estructura. c. El Southern Blot utiliza formamida para evitar estructuras secundarias, mientras que el Northern Blot emplea enzimas de restricción. d. En el Southern Blot el ADN se somete a digestión con enzimas de restricción, mientras que en el Northern Blot el ARN se trata con formamida y formaldehído para evitar estructuras secundarias.

¿Por qué se necesita una sonda específica para cada gen o especie en la hibridación in situ?. a. Porque todas las especies comparten exactamente la misma secuencia génica para cada proteína. b. Porque la hibridación in situ solo funciona con muestras de una única especie, no pudiendo aplicarse a otras. c. Porque las sondas solo pueden detectar proteínas, no ácidos nucleicos, y cada especie tiene proteínas diferentes. d. Porque un gen que codifica para una proteína similar en distintas especies puede tener diferencias en su secuencia, por lo que se requiere una sonda complementaria específica.

¿Qué diferencia existe entre el marcaje directo e indirecto de la sonda en la hibridación in situ?. a. El marcaje directo utiliza isótopos radiactivos, mientras que el indirecto emplea exclusivamente fluorocromos. b. El marcaje directo permite la visualización inmediata tras la hibridación mediante un fluorocromo, mientras que el indirecto requiere técnicas de inmunocitoquímica para su detección. c. El marcaje indirecto permite la visualización inmediata, mientras que el directo necesita pasos adicionales de detección. d. El marcaje directo se aplica en células, mientras que el indirecto solo puede usarse en tejidos incluidos en parafina.

¿Cuál es el principal objetivo de las técnicas de hibridación de ácidos nucleicos?. a. Cuantificar la concentración total de proteínas en una muestra biológica. b. Amplificar proteínas mediante la reacción en cadena de la polimerasa. c. Separar los ácidos nucleicos por tamaño mediante electroforesis. d. Detectar la presencia o ausencia de secuencias específicas de ADN o ARN en una muestra.

¿Por qué es necesario desnaturalizar tanto la sonda como el ADN de la muestra durante la hibridación in situ?. a. Para separar las hebras complementarias y permitir que la sonda se una específicamente a la secuencia diana. b. Para fijar las células y tejidos antes de la incubación con la sonda. c. Para marcar la sonda con fluorocromos antes de la hibridación. d. Para activar el marcador radiactivo y permitir la detección de la señal.

¿En qué propiedad de los ácidos nucleicos se basan las técnicas de hibridación para detectar secuencias específicas en una muestra biológica?. a. En la capacidad de las proteínas para unirse específicamente al ADN y ARN. b. En la complementariedad entre las bases nitrogenadas del ADN y ARN que permite la unión entre moléculas con secuencias afines. c. En la separación de los ácidos nucleicos por tamaño mediante electroforesis en gel de poliacrilamida.

¿Con qué finalidad se utiliza el Rojo Ponceau en el Western Blot?. a. Para bloquear las uniones inespecíficas de los anticuerpos a la membrana. b. Para romper los puentes disulfuro de las proteínas antes de la inmunodetección. c. Para detectar específicamente la proteína de interés mediante quimioluminiscencia. d. Para verificar que la transferencia de proteínas desde el gel a la membrana ha sido exitosa.

¿Qué propiedad de las proteínas se aprovecha durante la transferencia para que migren del gel a la membrana al aplicar el campo eléctrico?. a. Su coloración azul conferida por el azul de bromofenol. b. Su estructura tridimensional mantenida por puentes disulfuro. c. Su densidad aumentada por el glicerol. d. Su carga negativa proporcionada por el SDS.

¿Qué tipo de membranas se utilizan habitualmente en la transferencia del Western Blot para la posterior detección de proteínas con anticuerpos?. a. Membranas de PVDF o nitrocelulosa. b. Membranas de poliacrilamida y agarosa. c. Membranas de parafina y gelatina. d. Membranas de vidrio y silicona.

¿Por qué las proteínas más pequeñas migran más rápido que las grandes durante la electroforesis SDS-PAGE?. a. Porque el SDS les confiere una carga negativa mayor que a las proteínas grandes. b. Porque atraviesan con mayor facilidad los poros de la matriz de poliacrilamida. c. Porque el beta-mercaptoetanol acelera específicamente la migración de las proteínas de bajo peso molecular. d. Porque el glicerol reduce la densidad de las proteínas pequeñas facilitando su avance.

¿Por qué es necesario añadir beta-mercaptoetanol en la preparación de las muestras para SDS-PAGE?. a. Para romper los puentes disulfuro y desplegar la estructura tridimensional de las proteínas. b. Para dar coloración azul a la mezcla y poder seguir el frente de avanc. c. Para aportar carga negativa a las proteínas y que migren hacia el polo positivo. d. Para aumentar la densidad de la muestra y evitar que difunda fuera de los pocillos.

¿Cuál es la función del SDS en la electroforesis SDS-PAGE?. a. Aportar carga negativa a las proteínas para que todas migren hacia el polo positivo. b. Dar densidad a la mezcla para que no difunda fuera de los pocillos del gel. c. Teñir las proteínas de azul para visualizar el frente de avance durante la electroforesis. d. Romper los puentes disulfuro para desplegar la estructura tridimensional de las proteínas.

¿Por qué es necesario conocer la concentración total de proteínas en una muestra antes de realizar un Western Blot?. a. Para determinar el peso molecular exacto de cada proteína presente en el extracto. b. Para identificar la proteína específica de interés dentro del extracto. c. Para seleccionar el anticuerpo secundario más adecuado según la concentración proteica. d. Para asegurar que se carga la misma cantidad de proteínas en todas las muestras y así obtener resultados válidos y comparables.

¿Por qué es importante añadir inhibidores de proteasas durante la obtención del extracto de proteínas para un Western Blot?. a. Para mantener el pH de la solución amortiguadora entre 7 y 8. b. Para solubilizar las proteínas mediante detergentes como el SDS o el Tritón X-100. c. Para facilitar la ruptura de las membranas celulares y liberar las proteínas. d. Para evitar que las proteasas degraden las proteínas de interés durante el proceso de extracción.

¿Por qué se considera el Western Blot una técnica semicuantitativa?. a. Porque permite contar el número exacto de proteínas presentes en la muestra. b. Porque no se puede concluir con total firmeza la cantidad de proteína detectada, ya que las diferencias observadas podrían deberse a una distinta carga de proteínas en cada muestra. c. Porque no utiliza anticuerpos en su protocolo, lo que limita su capacidad de cuantificación. d. Porque solo permite detectar una única proteína por ensayo.

¿Qué función cumple el lavado con PBS-Tween entre las distintas fases del protocolo de inmunocitoquímica?. a. Permeabilizar la membrana celular para permitir la entrada de los anticuerpos. b. Eliminar el exceso de anticuerpos no unidos y reducir las uniones inespecíficas. c. Fijar las células al portaobjetos para evitar que se desprendan. d. Activar el marcador enzimático o fluorescente del anticuerpo secundario.

¿Cuál es una desventaja del marcaje por fluorescencia frente al marcaje enzimático en inmunohistoquímica?. a. Tiene una vida media corta, ya que la fluorescencia se va perdiendo, por lo que es necesario tomar una imagen digital para conservar lo observado. b. No permite la conservación de las preparaciones en el medio de montaje. c. Presenta una menor intensidad de señal que el marcaje enzimático. d. Requiere un microscopio óptico convencional para su visualización.

¿Cuál es la principal ventaja de la metodología indirecta frente a la directa en inmunohistoquímica?. a. No necesita anticuerpo primario, ya que el secundario se une directamente al antígeno. b. Utiliza anticuerpos obtenidos en la misma especie, lo que simplifica el proceso. c. Proporciona una mayor amplificación de la señal, lo que permite visualizar mejor la proteína marcada. d. Tiene menor probabilidad de uniones inespecíficas, ya que solo utiliza un anticuerpo.

¿Cuál es la finalidad de la recuperación del epítopo en una técnica inmunohistoquímica?. a. Sustituir el anticuerpo primario por un tampón específico como el citrate buffer. b. Fijar los antígenos al corte histológico para evitar que se desprendan durante la tinción. c. Deshidratar el tejido para facilitar la penetración de los anticuerpos. d. Hacer accesibles nuevamente los antígenos que han quedado ocultos por la fijación y el embebido en parafina.

¿Cuál es el procedimiento para obtener anticuerpos policlonales a partir de un animal inmunizado?. a. Se extraen directamente los anticuerpos monoclonales del bazo del animal mediante una punción. b. Se inocula el antígeno en un cultivo celular y se recogen los anticuerpos segregados al medio. c. Se aísla el suero del animal, se hace pasar por una columna con el antígeno inmovilizado y se eluyen los anticuerpos específicos unidos a dicho antígeno. d. Se fusionan los linfocitos B del animal con células de mieloma para obtener hibridomas y luego se cultivan por separado.