Técnicas de inmunodiagnóstico t1-6

Son G.B que tiene como función la fagocitosis (el fagocito rodea y destruye sustancias extrañas y elimina las células muertas) y la producción de citoquinas, proteínas reguladoras de las respuestas inmunitaria e inflamatoria.

Leucocitos sanguíneos más abundantes y se producen en la médula ósea, son de las primeras células en llegar al lugar de una infección.

Comprenden células centinelas en las respuestas a la infección. Los ______ se producen en la médula Ósea y viajan a través de la sangre hasta diversos tejidos y Órganos; una vez que llegan a su destino, se convierten en_____.

3 tipos de células implicadas en la infección parasitaria y las reacciones alérgicas.

Distribuidas en los tejidos linfáticos, el parénquima de Órganos y el epitelio mucoso. Se encargan de captar antígenos y de su presentación a otras células de la inmunidad.

Encargadas de combatir la membrana plasmática de células infectadas del propio cuerpo o células tumorales.

Cs m·s caracterÌsticas de la inmunidad adaptativa responsables de la especificidad y de la memoria de las respuestas inmunitarias. 2 tipos.

Cs que producen anticuerpos. Los anticuerpos se fijan a un antígeno específico y facilitan su destrucción a través de las células inmunitarias. Se llaman así porque son linfocitos de la médula Ósea.

Son linfocitos derivados del timo que atacan los antígenos directamente. También liberan citoquinas para controlar la respuesta inmunitaria.

Proteínas del tipo inmunoglobulinas con forma de Y que circulan por la sangre y que son usadas para identificar y atacar a esas sustancias extrañas, es decir, a los antígenos.

Sustancias ajenas que son dañinas y que invaden nuestro organismo y así Él lo reconoce. Pueden ser de origen externo o del propio cuerpo.

Zona del Ac que reconoce al Ag.

Parte específica del Ag que es reconocida por el Ac.

Resistencia que ofrece el organismo a la implantación y ataque de un agente causante de enfermedad infecciosa. Existen dos tipos.

Es inmediata, aparece a los pocos minutos u horas, intimidando y atacando al patógeno no deseado para evitar que prolifere y cause una infección. Una de las principales ventajas de este mecanismo es que no es especifico, es decir, desarrolla una respuesta inmune frente a cualquier agresor, aunque no haya atacado previamente. Esta· presente desde el nacimiento. También intervienen mecanismos innatos internos, principalmente células con capacidad fagocítica y células NK.

Presenta memoria, es decir, tras un primer contacto con el Ag específica, la respuesta ser· más potente en contactos posteriores. Precisa la activación y proliferación de linfocitos. Para esto se necesita la activación de las células presentadoras de antígeno. Tras reconocer el antígeno, se desencadena de forma simultánea una respuesta inmune humoral y celular en la que participan linfocitos y los anticuerpos y citoquinas liberados por ellos.

Respuesta específica que se caracteriza por luchar contra patógenos intracelulares, mediante la actuación directa de los linfocitos T y sin la necesidad de intervención de anticuerpos. Esta inmunidad provoca la eliminación de los microorganismos ya fagocitados o la destrucción de las células del organismo infectadas.

A través de sus receptores reconocen el antígeno, provocando la expansión clonal de linfocitos T que serán conducidos hasta los puntos donde se localiza la infección. Destruyen a las células con patógenos intracelulares o células Cancerosas.

Ayudan a los linfocitos B en la producción de anticuerpos y a los fagocitos a destruir los microbios ingeridos. Dentro de estos linfocitos hay diferentes subpoblaciones con diversos patrones específicos de producción de citoquinas, como LT h1 (respuesta a patógenos intracelulares), LTh2 (respuesta a patógenos extracelulares) o LTh17 (respuesta a hongos).

Se lleva a cabo mediante la producción de anticuerpos por parte de los linfocitos B. Después quedaron linfocitos B de memoria que proporcionaran una respuesta inmune más vertiginosa ante una infección por el mismo agente patógeno. Las Cs no combaten directamente los antígenos, sino que son las proteínas liberadas por las cs plasmáticas las que intervienen contra los antígenos, inactivando o marcando los agentes peligrosos para su destrucción. Linfocitos B pueden reconocer determinados antígenos sin necesidad de la cooperación de las células presentadoras de antígenos. Van desde la m. ÓSEACa hasta la sangre como linfocitos B vírgenes.

Respuesta en 7-10 días: Linfocito B coincide con un antígeno determinado y lo reconoce como extraño. Después empieza una expansión clonal produciéndose multitud de células B que secretan anticuerpos creados de manera específica para reaccionar ante el antígeno detectado. Para activarse y proliferar apareciendo células memoria y plasmáticas, requieren de la colaboración de los linfocitos T colaboradores.

Respuesta en 2-3 días): Se activan de linfocitos B de memoria. Cuando se enfrentan a un antígeno se producen inmunoglobulinas que se unen a Él y que pueden ser de distintos tipos.

Predominante en las mucosas y secreciones (saliva, moco, lágrimas,etc.), previene la entrada y colonización de patógenos. lgA. LgE. LgG y LgM. LgM.

La neutralización del antígeno, la activación del complemento , la opsonización y fagocitosis de patógenos son algunas de sus principales funciones. lgA. LgE. LgG y LgM. LgM.

Es la primera que se sintetiza en el primer contacto con el antígeno, secretándose para la primera defensa contra infecciones virales o bacterianas. lgA. LgE. LgG y LgM. LgM.

Interviene en la defensa ante parásitos y en reacciones de hipersensibilidad alérgica. lgA. LgE. LgG y LgM. LgM.

Grupo de proteínas plasmáticas numerosos y complejo que participan en la defensa inmune, facilitan la eliminación del Ag y generan una respuesta infl. Participa en funciones efectoras de la inmunidad innata y adquirida. Su acción supone una reacción en cascada que determina una activación enzimática secuencial cuya fase final es la lisis del microorganismo. se efectúa por tres vías.

Comienza con el contacto del complemento directamente con las superficies microbianas. Pertenece a la inmunidad innata.

Activa al complemento por la unión de Ag-Ac. Pertenece a la inmunidad adaptativa.

Comienza con la unión de una proteína plasmática, lectina ligadora de manosa (MBL). Se inicia sin necesidad de anticuerpos, por lo que pertenece a la inmunidad innata. Cualquiera que sea la vía de activación, se van liberando enzimas en cascada, siendo el componente central la proteína C3. Un fragmento, el C3b, se une al microorganismo hasta recubrirlo favoreciendo esto la unión de los fagocitos que tienen receptores C3b en superficie. Por otro lado, el fragmento C3a junto al C5a incitan la llegada de leucocitos, principalmente monocitos y neutrófilos, y la potenciación de la inflamación de la zona.

Anticuerpo desarrollado por el sistema inmunitario que actúa en contra de uno o mas antígenos del propio individuo.

Ac Contra antígenos localizados en el núcleo o citoplasma de las células de muchos tejidos y Órganos. Por ello, se asocian con mayor frecuencia con enfermedades sistémicas.

Pueden encontrarse en distintas enfermedades autoinmunes, como en AR, ES o LES.

Pueden ir contra el ADN bicatenario o de cadena Única.

Se dirigen especialmente hacia el nucleosoma y a otras estructuras de la cromatina.

Provocan un ataque general multiorgánico con múltiples manifestaciones clínicas. Conocidas también como conectivopatías, comparten una lesión anatomopatológica del tejido conectivo con inflamación, dando lugar a una disminución de la calidad de vida del paciente. Además, se da la posibilidad de que un mismo individuo posea dos enfermedades autoinmunes diferentes al mismo tiempo.

Enfermedad inflamatoria crÛnica que afecta a las articulaciones, provoca deformación, destrucción de cartílago y falta de capacidad funcional. Uno de los biomarcadores es el factor reumatoide que corresponde a la inmunoglobulina (IgM, IgG o IgA) enfocada contra diferentes epítopos. Sin embargo, los anticuerpos anti péptidos cíclicos citrulinados se consideran + específicos.

Enfermedad multisistémica determinada por autoanticuerpos contra varios antígenos celulares. Los ANA son los + representativos.

Cs inmunitarias fabrican anticuerpos dirigidos al núcleo, citoplasma y la membrana celular, provocan inflamación por todo el cuerpo. Destaca una elevada sensibilidad para esta enfermedad por parte de los anticuerpos ANA.

Los ANA también suelen dar resultado positivo, aunque no confirman por sÌ mismos la enfermedad. Por ello que el diagnóstico se basa en la detección de anticuerpos asociados con frecuencia a la enfermedad, como los anti SS-A y los anti SS-B.

La respuesta inmune va contra un ˙único Ag ubicado en un Órgano. Por ello, se pierde la tolerancia inmunológica genera un daño + puntual. Las reacciones se desencadenan contra uno o + constituyentes específicos de las células de un Órgano.

Se destruyen de manera selectiva células del páncreas (células β de los islotes de Langerhans). Para su diagnóstico, se emplean los autoanticuerpos contra el citoplasma y la membrana plasmática de las células del islote, los anticuerpos contra la descarboxilasa del Ácido glutámico, los anticuerpos antiinsulinas y los autoanticuerpos anti-ZnT8.

Se produce una reacción del sistema inmunitario contra la glándula tiroides, con pérdida de función e inflamación. Se encuentran anticuerpos séricos contra elementos celulares de la glándula tiroides y anticuerpos frente a la peroxidasa tiroidea involucrados en la yodación de la tiroglobulina.

Surge por mecanismos autoinmunes y engloba la producción de inmunoglobulinas contra antígeno del tiroides, dermis y tejidos orbitarios. Según la etiología, hay positividad de varios anticuerpos.

Puede evolucionar a una insuficiencia hepática grave. Según los anticuerpos detectados, hay dos clases.

HEPATITIS AUTOINMUNE: Anticuerpos antinucleares y/o anti músculo. DE TIPO I. DE TIPO II.

HEPATITIS AUTOINMUNE: Anticuerpos antimicrosomales de hígado/RIÑON. DE TIPO I. DE TIPO II.

Puede evolucionar hacia una insuficiencia de la corteza suprarrenal de gravedad y, en ella, se detectan autoanticuerpos contra las células corticales suprarrenales.

Causa despigmentación y destrucción de las células productoras de melanina. Provoca manchas blancas en la piel y su característica inmunológica es la producción de anticuerpos contra proteínas de los melanocitos.

Componente de la sangre resultante tras permitir la coagulación y eliminar el coagulo resultante. Es equivalente al plasma sanguíneo, pero sin las proteínas involucradas en la coagulación.

Los especímenes de sangre deben formar un coágulo a Tº ambiente(18-24ºC) (20 MIN).

La sangre se centrifuga dentro de las 2 horas siguientes a la extracción para separar el sólido de la fase líquida. (10 MIN).

Es importante, para mantener la estabilidad de los anticuerpos, que preserven el calor y de la contaminación microbiana. Es recomendable su análisis inmediato, si no es así hay que tenerlas: En refrigeración (2-8 °C). Congelarlas a temperatura ≤-20 °C. 50-70 °C bajo cero, en alícuotas, en tubos con tapa hermética, con la adicción o no de conservadores.

Si la muestra no se van a procesar en 2-3 días se debe: En refrigeración (2-8 °C). Congelarlas a temperatura ≤-20 °C. 50-70 °C bajo cero, en alícuotas, en tubos con tapa hermética, con la adicción o no de conservadores.

Para el almacenamiento en años, es conveniente hacerlo: En refrigeración (2-8 °C). Congelarlas a temperatura ≤-20 °C. 50-70 °C bajo cero, en alícuotas, en tubos con tapa hermética, con la adicción o no de conservadores.

Es un suero estable y homogéneo que permite la validación y garantía del buen funcionamiento en los análisis clínicos. Pueden ser individuales o pool de sueros, preparados por cada laboratorio, o sueros comerciales de control, donde los fabricantes valoran por distintos métodos analíticos los valores que m+s se ajusten a sus condiciones analíticas. También pueden ser sueros preparados por laboratorios de referencia.

El espécimen del que conocemos la concentración exacta del analito.

Un espécimen en el que se conoce el rango de valores que debe presentar.

Estas técnicas se caracterizan por su rapidez y facilidad, de forma que la lectura de resultados ocurre generalmente en 2-10 minutos, formándose a simple vista agregados insolubles. En general, son técnicas de baja sensibilidad y con dificultad para la cuantificación.

Ordene la frase correctamente: MATERIAL DE TÉCNICA DE AGLUTINACIÓN: • Reactivos usados son_____ ____ ______,____, _________ _____ ___ ___ y ___ ________, controles positivos (___ ___ ___) y controles negativos (___ ___ _____), sueros _______, reactivo de ________, etc. • Materiales de laboratorio: es frecuente el uso de tarjetas de ______, ________, agitadores, centrífuga y tubos de centrífuga, ____ _______ y micropipetas, kits comerciales con placas de _________, etc. "SUSPENSIONES_DEL_ANTIGENO" "SUERO_SIN_ANTICUERPOS" "MICROTITULACION" "COOMBS" "HOMOGENEIZADORES", "AGLUTINACION" "ERITROCITOS_SENSIBILIZADOS_CON_AC" "PIPETAS_AUTOMATICAS" "PROBLEMA" "LATEX" "SUERO_CON_ANTICUERPOS" "NO_SENSIBILIZADOS".

Mediante este soporte, se mezcla la suspensión de células o partículas con el suero y se oscila la lámina durante unos dos minutos para apreciar, en caso de reacción positiva, la formación de grumos macroscópicos. Lámina o soporte plano de vidrio o de plástico (portaobjetos, tarjeta...). Micro placas o placas de micro titulación. Aglutinación en tubos. Técnica de inhibición de la AglutinaciÛn.

Los estándares constan de 96 pocillos (8 filas x 12 columnas) y en ellas se produce sedimentación de partículas en el fondo cuando se aglutinan. La formación de velo en la superficie del pocillo evidencia una reacción positiva de AglutinaciÛn, mientras que, si no existe AglutinaciÛn, los antígenos particulados sedimentan en forma de botón. Lámina o soporte plano de vidrio o de plástico (portaobjetos, tarjeta...). Micro placas o placas de micro titulación. Aglutinación en tubos. Técnica de inhibición de la AglutinaciÛn.

Tras su centrifugación, cuando no se generan grumos visibles, el resultado se considera negativo. Lámina o soporte plano de vidrio o de plástico (portaobjetos, tarjeta...). Micro placas o placas de micro titulación. Aglutinación en tubos. Técnica de inhibición de la AglutinaciÛn.

Emplean partículas recubiertas con un antígeno y un antisuero con los anticuerpos donde se añade la muestra desconocida, la ausencia del antígeno ser· una Aglutinación positiva y la presencia de antígeno en la muestra, una aglutinación negativa. Lámina o soporte plano de vidrio o de plástico (portaobjetos, tarjeta...). Micro placas o placas de micro titulación. Aglutinación en tubos. Técnica de inhibición de la Aglutinación.

Aparato que mide la concentración del analito según la transmitancia.

Equipo que permite automatización (los +sofisticados miden la cinética de la formación de los complejos).

Para la precipitación en gel se preparan en el laboratorio geles de ____O_____. Para ello, se disuelve, a una temperatura superior a 50 °C, agarosa al 1%, en tampón fosfato PBS o solución salina. El gel formado se deposita en caliente sobre el soporte donde se realizar· la reacción. Una vez frío, solidificar· y, mediante un sacabocados, se efectuaran los pocillos necesarios para depositar los componentes de la reacción. Una vez que difunden a través del gel los inmunocomplejos, se observan a simple vista, al aparecer líneas o bandas de precipitación.

Para la precipitación en gel se preparan en el laboratorio geles de agar o agarosa .Para ello, se disuelve, a una temperatura superior a 50 °C, agarosa al 1%, en _______ ____ o ________ El gel formado se deposita en caliente sobre el soporte donde se realizar· la reacción. Una vez frío, solidificar· y, mediante un sacabocados, se efectuaran los pocillos necesarios para depositar los componentes de la reacción. Una vez que difunden a través del gel los inmunocomplejos, se observan a simple vista, al aparecer líneas o bandas de precipitación.

Para la precipitación en gel se preparan en el laboratorio geles de agar o agarosa. Para ello, se disuelve, a una temperatura superior a 50 °C, agarosa al 1%, en tampón fosfato PBS o solución salina. El gel formado se deposita en caliente sobre el soporte donde se realizar· la reacción. Una vez frío, solidificar· y, mediante un _______, se efectuaran los pocillos necesarios para depositar los componentes de la reacción. Una vez que difunden a través del gel los inmunocomplejos, se observan a simple vista, al aparecer líneas o bandas de precipitación.

Para la precipitación en gel se preparan en el laboratorio geles de agar o agarosa. Para ello, se disuelve, a una temperatura superior a 50 °C, agarosa al 1%, en tampón fosfato PBS o solución salina. El gel formado se deposita en caliente sobre el soporte donde se realizar· la reacción. Una vez frío, solidificar· y, mediante un sacabocados, se efectuaran los pocillos necesarios para depositar los componentes de la reacción. Una vez que difunden a través del gel los inmunocomplejos, se observan a simple vista, al aparecer líneas o bandas de _______.

Si existe afinidad entre el antígeno y el anticuerpo, y además hay una concentración elevada de ambos, se condiciona que más complejos permanezcan unidos.

Técnica que implica la visualización de la interacción que se produce entre un Ac y una partícula antigénica, provocando formación de grumos macroscópicos. Se basa en detectar la reacción de AglutinaciÛn de los inmunocomplejos. En función al tipo de Ac que interaccione, la capacidad aglutinante puede ser incrementada, así, IgM presentan mayor capacidad por tener una estructura de pentámero (con cinco sitios de unión).

DE IMPORTANCIA PARA EL COMPLEJO AC AG • La ______ del complejo al medio. • La ______ de los enlaces que los unen.

En el caso de AglutinaciÛn, el Ag es _______. Si el Ag es ____, es posible emplear distintas partículas y realizar una unión química apta para fines diagnósticos. Para el empleo de la técnica en diagnóstico han de controlarse parámetros como la temperatura, el pH y la concentración de electrolitos.

Cuando el Ac o Ag esta· en exceso en el transcurso del proceso y se inhibe la reacción de aglutinación.

Utiliza Ag particulados (pudiendo ser esporas, bacterias o, incluso, algún protozoo) y en suspensión; de esta forma, expresaron en sus membranas los determinantes antigénicos o epítopos que formaran parte de los inmunocomplejos.

AGLUTINACION DIRECTA: Cuando el suero problema se mezcla con esta suspensión antigénica, se establece ________la red de Aglutinación de los complejos inmunes. El resultado de la prueba es ______, ya que su lectura se realiza a ______ ______ Existen distintos tipos en función del soporte sobre el que se realice la reacción: en _______(formación de grumos si la reacción es positiva) o en una ______ __ ______ (el positivo se hace patente, formándose un _____en la superficie).

AGLUTINACION DIRECTA: Una aplicación es la hemaglutinación directa, donde se aplica la técnica a la.

Se utilizan Ag solubles, que se insolubilizan por medio de su fijación a un soporte sólido inerte o a una célula (eritrocitos), con el objetivo de obtener un Ag particulado.

Si se trata de una Aglutinación ______, incluso puede ser calculada la concentración de Ag en muestra, si de forma simultanea se realiza una curva de titulación estándar de Ag.

Método para calcular la concentración de Ag: consiste en incubar cantidades constantes de la partícula aglutinante sensibilizada con el Ag particulado con cantidades constantes y aglutinantes del Ac específico. El exceso de Ag libre producir· una inhibición de la AglutinaciÛn por competición por el Ac. Si se realiza la curva estándar de Ag libre, se podrá· calcular la concentración que inhibe la AglutinaciÛn de la muestra problema.

Forma de determinar la actividad de los anticuerpos de forma semicuantitativa , consiste en realizar diluciones seriadas del suero del paciente e incubarlas con cantidades de Ag que sean constantes.

El título de Ac será la ______ de la máxima dilución de suero que se produce una Aglutinación ___.

Se basa en la unión que se produce entre Ag y Ac, ambos solubles, y la formación de inmunocomplejos insolubles que precipitan en el medio de reacción, inactivando de esta forma a los Ag.

Cuando la precipitación de los complejos inmunes se produce en un medio líquido, se genera una turbidez que puede ser medida y valorada. El proceso consiste en poner Ac y Ag en distintas cantidades y dejar que se produzca su difusión de forma pasiva. La técnica también se conoce como técnica de ____ ____. Sin embargo, es una técnica clásica que no es de uso frecuente en la actualidad, ha sido reemplazada por las reacciones de precipitación en gel.

Compara la intensidad del haz de luz incidente con el que es transmitido a través del tubo, estableciéndose una relación entre la concentración del analito y la transmitancia determinada por espectrofotometría, de forma que se puede averiguar la concentración del analito.

Se emplea siempre que existan grandes concentraciones de partículas dispersantes en las muestras. Puede ser empleado en la determinación cuantitativa de IgA, IgG e IgM en suero humano, para lo que se emplearan antisueros con anti-IgA, anti-IgG y anti-IgM. En el momento en el que se forman los inmunocomplejos aparece una turbidez, que ser· medible por fotometría a 365 nm. La concentración de inmunoglobulinas que están en la muestra es proporcional a los inmunocomplejos formados.

En la INMUNOTURBIDIMETRIA La concentración de inmunoglobulinas que están en la muestra es proporcional a los.

Si la muestra a analizar presenta un número pequeño de complejos inmunes, no habrá· tantas partículas dispersantes, por lo que es mAs recomendable recurrir a la ___________ La razón es porque habrá· una menor dispersión y la intensidad del haz incidente ser· pequeña.

La técnica mejora la sensibilidad de dos formas: • Utilizando un láser. • Agregando polietilenglicol a la solución, ya que permitirá aumentar el tamaño del agregado.

NEFELOMETRIA: La técnica mejora la sensibilidad de dos formas: • Utilizando un láser. • Agregando ________a la solución, ya que permitirá aumentar el tamaño del agregado. Los inmunocomplejos formados se cuantifican por un gradiente de difracción del rayo láser que producen, y se medirá la dispersión de la luz en ·ángulo a __ grados.

La principal limitación de esta técnica radica en la interferencia que puede causar la presencia de otros agregados moleculares insolubles con diferente origen. A pesar de ello, es un método sensible, reproducible y rápido.

Los nefelómetros más simples se basan en una lectura de punto final, sin embargo, otros emplean un sistema de lectura continua, cuantificando la formación de los complejos en el transcurso del tiempo. V. F.

Reacciones que forman un complejo inmunitario pueden producirse en una solución o en una matriz de agar. En este segundo caso, Ag y Ac difunden de manera simultánea y mutua en el agar. Cuando uno de ellos pertenece a parte de la matriz del gel, al añadir el complementario se formar una líneas de precipitación. La difusión de ambos, en gel se produce a una velocidad que es dependiente de su concentración, de la T™ a la que se realice el ensayo, de la viscosidad del medio y del tamaño de las moléculas empleadas. Cuando se emplean mezclas de diferentes Ag y Ac, el resultado mostrar en proporción una variedad de bandas de precipitación.

La clasificación de este tipo de técnicas se realiza dependiendo de: • Si la determinación es: cuantitativa o cualitativa. • Si la difusión de los componentes: es espontánea o inducida. • Si los componentes implicados en la reacción difunden: manera individual o conjunta.

Destacan varios tipos: Inmunodifusión simple: Ac incorporado en soporte sólido. Inmunodifusión doble: Ag y Ac difunden simultáneamente.

Inmunodifusión _____: Ac incorporado en soporte sólido.

Inmunodifusión _____ Ag y Ac difunden simultáneamente.

Contiene Ag en el agar, donde se encuentra el Ac específico del Ag. La muestra es colocada en unos orificios realizados en el agar, de forma que el antígeno va a difundir radialmente, formándose halos de precipitación generados de la relación Ag-Ac.

Variante de la inmunodifusión radial forzada donde se somete a los Ag a una difusión sobre pocillos de agar que contienen el Ac. Es importante el control del pH del gel para que los Ac tengan carga neta neutra y no migren por la acción del campo eléctrico. Se forman una serie de precipitaciones alargadas (cohetes o rockets), cuya altura ser· considerada en proporción a la concentración del Ag. También se interpolan los valores desconocidos a una curva de calibrado previa, una técnica cuantitativa.

EN LA ELECTROINMUNODIFUSION SE PRESENTAN UNAS PRECIPITACIONES ALARGADAS O.

El Ag y el Ac son colocados sobre el gel a la vez y difunden de forma conjunta. Las concentraciones de Ag y Ac han de ser similares, ya que, si no, no se forma el precipitado (punto de equivalencia). La sensibilidad que presenta esta metodología es baja.

EN LA INMUNODIFUSION RADIAL DOBLE: Las concentraciones de Ag y Ac han de ser similares, ya que, si no, no se forma el precipitado O _____ ____ _______.

Técnica cualitativa en la que las muestras posicionadas sobre un gel son sometidas auna separación electroforética (Separa fracciones proteicas específicas en una mezcla Ag). Difusión en paralelo, generando bandas y arcos exclusivos para cada Ag.

Variante que supone una difusión radial doble forzada mediante la aplicación de un campo eléctrico. Ventajas: reducción del tiempo de incubación y el aumento de la sensibilidad de la técnica.

La aplicación directa de la técnica es una la evaluación de las proteínas del mieloma y la caracterización de inmunoglobulinas monoclonales. 2 etapas de forma consecutiva.

INMUNOFIJACIÓN : 1.Una _______en gel de agarosa, pudiendo establecer así la separación de las proteínas de la mezcla, o Ag que contenga. 2.A continuación, se realiza una ________ del anticuerpo directamente sobre en gel, para que precipite la proteína (Ag) que quiere detectarse.

Se caracteriza por una alta sensibilidad para la identificación de Ag y Ac. Combina electroforesis en gel SDS-poliacrilamida y una alta sensibilidad de la enzima empleada, considerándose una técnica cuantitativa en la determinación de Ag-Ac.

WESTERN BLOT: Fases diferenciadas: 1.Se separaran las proteínas o Ag de la muestra mediante ________, donde la separación se hará por ______. Se emplea ____(detergente que desnaturaliza la proteína) para que la migración dependa, exclusivamente, del ___ ______ de la proteína. 2.Serán transferidas a un soporte sólido (membrana de nitrocelulosa o nailon), donde son fijadas por ________ 3.Serán visualizados. Para ello, son incubados con ______ de anticuerpo (anticuerpos primarios o secundarios que llevan asociado un marcaje que puede ser enzimático, colorimétrico o fluorescente), pudiéndose así detectar las bandas identificadas por los Ac específicos.

Esta técnica es empleada para detectar Ac en suero. Ventajas: Su alta sensibilidad y su elevada especificidad, haciendo que el resultado de la prueba sea contundente. Desventajas: Resultados erróneos, dando lugar a falsos positivos por reacciones espontáneas no esperadas de los Ac específicos. Además, si el procedimiento y protocolo no es seguido con rigurosidad, pueden detectarse falsos negativos. Precisa de un alto coste en tiempo y dinero.

Mide la cantidad de Ac que no origina reacciones visibles de forma indirecta. Es considerado parte de la inmunidad innata y puede ser activado de dos maneras: • Por proteínas de fase aguda. • Por la vía alternativa, que son polisacáridos y membranas microbianas.

El sistema de complemento es considerado parte de la inmunidad innata y puede ser activado de dos maneras: • Por :_____ de _______ • Por la vía alternativa, que son ________ y _____ ________.

El sistema de complemento es considerado parte de la inmunidad:

El sistema de complemento es considerado parte de la inmunidad innata y puede ser activado de dos maneras: • Por proteínas de fase aguda. • Por la vía alternativa, que son polisacáridos y membranas microbianas. Ambas vías acaban dando lugar a una enzima esencial (___ ________) que activa el complemento, atacando a membranas con la formación de poros o por lisis celular osmótica. Es la formación del inmunocomplejo Ag-Ac la que activa el sistema del complemento y produce complejos que lesionan membranas celulares (para ello, ser necesario que todos los _____ estén bien cuantificados de forma previa a la medición y se usen controles de cada uno de ellos).

FIJACION DEL COMPLEMENTO 1.Se incuba el suero problema con cantidades conocidas de ______ y de _______, que es el blanco del anticuerpo en estudio. 2.Se añade un sistema ______que sea una matriz que contenga los Ac específicos (_______). El grado de fijación del complemento indica la cantidad relativa de ______en la muestra.

Es usada para el diagnóstico serológico de infecciones virales, como labrucelosis. Se emplea en la titulación de Ag, para caracterizarlos y clasificarlos a nivel serológico.

Ventajas: Permite medir los títulos de determinados Ac, o puede modificarse para detectar determinados Ag. Además, es precisa. Desventajas: Prueba compleja en la puesta a punto de estándares y reactivos, requiriendo de un equilibrio en la adición del complemento y de Ag. Además, tiene aplicaciones limitadas, es laboriosa y requiere.

: Hacen uso de nanopartículas coloreadas (metales pesados). Se aplican en pruebas sobre soporte sólido que darán lugar a la aparición de líneas coloreadas de precipitación.

Se añade el anticuerpo que corresponda y una conocida cantidad del mismo antígeno marcado (patrón). De esta forma, los dos antígeno competirán por los anticuerpos. Una vez que se lleva a cabo la reacción de interacción, se establece la cantidad de patrón que no se ha conjugado, quedando, por tanto, libre. Dicha cantidad resultar· inversamente proporcional a la cantidad de antígeno de la muestra. Este mismo proceso se puede aplicar para determinar un anticuerpo, añadiendo, en este caso, el mismo anticuerpo marcado como patrón. INMUNOENSAYOS NO COMPETITIVOS. INMUNOENSAYOS COMPETITIVOS. INMUNOENSAYOS HOMOGENEOS. INMUNOENSAYOS HETEROGENEOS.

Se añade un anticuerpo marcado. A mayor cantidad del antígeno presente en la muestra, mayor cantidad de anticuerpos marcados interaccionaron con El y formaran inmunocomplejos. Se establece una relación directamente proporcional entre la cantidad de anticuerpo marcado que ha formado inmunocomplejos y la concentración del antígeno de la muestra problema. También se emplea este procedimiento para determinar un anticuerpo, añadiendo el antígeno marcado. INMUNOENSAYOS NO COMPETITIVOS. INMUNOENSAYOS COMPETITIVOS. INMUNOENSAYOS HOMOGENEOS. INMUNOENSAYOS HETEROGENEOS.

Separar los inmunocomplejos de las moléculas no conjugadas que quedan libres. Son técnicas que usan reactivos en fase sólida y una serie de lavados para lograr la separación de las moléculas no conjugadas. Presentan utilidad para determinar sustancias de alto peso molecular. INMUNOENSAYOS NO COMPETITIVOS. INMUNOENSAYOS COMPETITIVOS. INMUNOENSAYOS HOMOGENEOS. INMUNOENSAYOS HETEROGENEOS.

No precisan la separación de las moléculas sobrantes o libres. Se llevan a cabo + rápidamente y en un menor número de pasos.. Estas técnicas permiten determinar sustancias de bajo peso molecular y de alta concentración (estos inmunoensayos suelen ser utilizados, por ejemplo, en la determinación de drogas y hormonas). INMUNOENSAYOS NO COMPETITIVOS. INMUNOENSAYOS COMPETITIVOS. INMUNOENSAYOS HOMOGENEOS. INMUNOENSAYOS HETEROGENEOS.

Según aumenta la cantidad de analito en la muestra, con mayor rapidez se reduce la señal. En este caso se considera que la muestra es positiva si no existe señal en la tira, mientras que será negativa cuando se origina coloración en la tira. ANALISIS COMPETITIVOS. ANALISIS NO COMPETITIVOS.

Según aumentan los analitos en la muestra, dan lugar a mayor coloración en la tira. En este caso, la muestra es positiva si hay presencia de analito y negativa si no esta presente el analito. La reacción se lleva a cabo empleando tiras de nitrocelulosa y, como marcador, nanopartículas coloreadas (en general, son metales pesados). Dependiendo del tipo de dichas nanopartículas, se generaran diferentes colores. ANALISIS COMPETITIVOS. ANALISIS NO COMPETITIVOS.

Suponen aligerar los procedimientos de analíticos y un menor empleo de reactivos. Se trata de técnicas inmunológicas de fácil manejo e interpretación de resultados, no requiriendo de laboratorios sofisticados ni de la existencia de personal o equipamiento especializado. Existen ensayo para la detección de anticuerpos o antígenos en una muestra problema.

TEST RAPIDO 1. Una vez colocada la muestra con el Ag a analizar en la zona de siembra de la tira, mediante capilaridad fluirá hasta la zona del ______, zona donde se encuentra inmovilizado el Ac específico marcado . 2. Si existe Ag, se originarán ________ que MIGRARÁN formando una banda hasta la zona de _________ 3. La muestra continuar· migrando hacia la zona de _______, en la cual el exceso de conjugado será capturado por un Ac anti-conjugado, implantándose una banda si el Ag está presente o no.