TÉCNICAS PARA EL ANÁLISIS DE SANGRE 

FASES DE ANALISIS DE SANGRE: PRESUNTIVA U ORIENTATIVA, FASE CONFIRMATORIA, DETERMINACIÓN DE ORIGEN, DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS Y FACTOR Rh y HUELLA GENÉTICA. PRESUNTIVA U ORIENTATIVA, FASE CONFIRMATORIA, DETERMINACIÓN DE ORIGEN y HUELLA GENÉTICA. FASE CONFIRMATORIA, DETERMINACIÓN DE ORIGEN, DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS Y FACTOR Rh y HUELLA GENÉTICA. FASE CONFIRMATORIA, DETERMINACIÓN DE ORIGEN, DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS Y FACTOR Rh.

Técnicas presuntivas: Fenolftaleína. Bencidina. Leuco malaquita verde. Luminol. Confirmatoria.

¿Qué es la fenolftaleína?. Se utiliza para realizar muchas pruebas y análisis, ya que su propiedad primaria es la de cambiar de color en función del pH del elemento al que se le aplica. Contribuyen a una mayor estabilidad, aumentando la vida útil del producto. Compuesto químico que las células usan para elaborar los elementos fundamentales del ADN y el ARN. También forma parte de muchas sustancias del cuerpo que proporcionan energía a las células.

Procedimiento de la prueba de fenolftaleína. Agregar agua oxigenada. Calentar un minuto a 100º C. Humedecer un hisopo con solución salina, frotar la muestra problema. Colocarlo en un tubo con 1 mL. de solución salina. Añadir unas gotas de reactivo.

Prueba de Bencidina o Adler. Es la primera prueba a la que se somete el paciente que presenta un problema de pérdida auditiva. Es una prueba neurológica muy común que se utiliza en el campo ORL y neurológico para diagnosticar trastornos relacionados con la pérdida del equilibrio y la coordinación motora. Se emplea bencidina disuelta en ácido acético o bien en una mezcla de etanol y el mencionado ácido. En las lesiones vestibulares periféricas, los índices se desvían hacia el lado de la lesión.

Procedimiento de la Prueba de Bencidina o Adler. Añadir 1 ó 2 gotas de solución de bencidina, después de unos momentos observar que no de coloración. Humedecer un hisopo con H2O destilada y frotarlo sobre la mancha problema. Agregar la misma cantidad de H2O2 sobre el hisopo.

¿Qué es la prueba de Luminol?. El luminol es un tipo de glúcido encontrado en los vegetales, las frutas y la miel. Es un monosacárido con la misma fórmula molecular que la glucosa. El Luminol es un derivado del ácido ftálico. Su mayor importancia reside en la reacción de quimioluminiscencia que da con peróxidos en presencia de complejos de hierro como catalizadores. El luminol los glúcidos más sencillos; no se hidrolizan, es decir, no se descomponen en otros compuestos más simples.​.

¿Para qué se utiliza el Luminol?. consiste en la disolución de un sólido impuro en la menor cantidad posible del solvente adecuado y en caliente. es una reacción química entre un lípido saponificable o ácido graso y una base o solución alcalina. se utiliza en química forense para detectar manchas de sangre ya que éste cataliza la oxidación con peróxido de hidrógeno bajo emisión de luz, el luminol produce luz al oxidarse.

¿Que son los cristales de hemina o de Teichann?. La hemoglobina, cuando es tratada con ácido acético, se separa inmediatamente de las proteínas y del grupo prostético. Durante la hidrólisis la globulina se desnaturaliza. Consiste en hacer reaccionar un cloruro de ácido o un anhídrido con un compuesto aromático apropiado. Para obtener una cetona se procederá así: Ozonización de alquenos. La ozonización de alquenos da lugar a aldehídos o cetonas, según que el carbono olefínico tenga uno o dos sustituyentes hidrocarbonados. Se producen cuando los ácidos carboxílicos reaccionan con aminas o amoníaco en un proceso que recibe el nombre de amidación.

Procedimiento de los cristales de hemina o de Teichmann. Calentar lentamente y a baja temperatura la laminilla hasta evaporación. Dejar enfriar y observar al microscopio. Deslizar entre lamina y laminilla por capilaridad, unas gotas del reactivo de Teichmann. Colocar la muestra problema en el centro de una laminilla de vidrio y poner encima de ella un cubreobjetos.

¿Qué es la prueba de takayama?. UNA VEZ PREPARADA LA MEZCLA, SE GUARDA EN UN FRASCO ÁMBAR. LA SOLUCIÓN DEBERÁ SER PREPARADA INMEDIATAMENTE ANTES DE UTILIZARSE. El hidróxido de sodio efectúa una hidrólisis alcalina, liberando el grupo prostético de la globina; el fierro del hem en este momento se encuentra como ion férrico (+3) debido a la formación de la metahemoglobina en el proceso de desecación de la mancha de sangre. LA PRUEBA ES MÁS SENSIBLE Y SENCILLA QUE LA DE LOS CRISTALES DE HEMINA Y NO SE DAN CASOS DE FALSAS REACCIONES POSITIVAS.

Prueba de Takayama (Hemocromogeno). OBSERVAR AL MICROSCOPIO. CALENTAR LA LAMINILLA A BAJA TEMPERATURA DURANTE 30 SEGUNDOS. COLOCAR UNA PEQUEÑA CANTIDAD DE MUESTRA PROBLEMA ENTRE UNA LAMINILLA PORTAOBJETOS Y UN CUBREOBJETOS. DESLIZAR POR CAPILARIDAD UNAS GOTAS DEL REACTIVO ENTRE LÁMINA Y LAMINILLA.

¿Qué es un antígeno?. Se puede utilizar para tratar o prevenir accidentes cerebrovasculares que ocurren a causa de la formación de coágulos sanguíneos. Es una sustancia que induce la formación de anticuerpos (amenaza). Esta sustancia puede ser extraña (no nativa), proveniente del ambiente (como químicos) o formada dentro del cuerpo. Utilizado principalmente para tratar la fiebre y el dolor leve y moderado, ​​ aunque su eficacia en el alivio de la fiebre en niños no está clara.

¿Que es la técnica de precipitinas en tubo en capilar?-PREGUNTA ABIERTA-.

Técnicas para la determinación del origen de la sangre. - ¿Que se refiere la Interpretación de resultado?. La aparición de un anillo de precipitación en la interfase de los dos líquidos indicará “reacción positiva”. La observación se hace con luz indirecta y sobre el fondo oscuro.

Técnicas para la determinación del origen de la sangre.- ¿A que se refiere Inmunoensayo para la detección cualitativa de sangre humana?. Lleve la muestra a temperatura ambiente si ha sido refrigerada. Remueva el dispositivo de su empaque sellado. Etiquete el dispositivo con el número del caso. Añada 6-7 gotas de muestra (200 uL) al pocillo de muestra “S”. .

¿Que es la La precipitación sobre gel?. Las membranas de las células del organismo humano incluyendo los eritrocitos están formadas por varias capas de moléculas lipídicas, proteicas, y carbohidratos distribuidos en tal forma que permiten una separación entre el medio intracelular y el medio extracelular. Las moléculas del anticuerpo (inmunoglobulina) reaccionan con el antígeno (proteína soluble) para formar un precipitado fácilmente visible bajo condiciones de luz apropiadas a las concentraciones equivalentes de antígeno y de anticuerpo. Tiene la ventaja de acelerar la difusión sobre el gel y por lo tanto disminuye el tiempo de reacción, además de ser más sensible que las otras técnicas, pero requiere un equipo más costoso. Tiene la ventaja de poder realizarse con el extracto de una mancha de sangre, aunque este sea turbio, y requiere de muy pequeña cantidad de muestra, pero su desventaja es que necesita  varias horas para que se efectúe la difusión.

¿Que es la La técnica inmunoelectroforesis cruzada.?. Las moléculas del anticuerpo (inmunoglobulina) reaccionan con el antígeno (proteína soluble) para formar un precipitado fácilmente visible bajo condiciones de luz apropiadas a las concentraciones equivalentes de antígeno y de anticuerpo. Tiene la ventaja de acelerar la difusión sobre el gel y por lo tanto disminuye el tiempo de reacción, además de ser más sensible que las otras técnicas, pero requiere un equipo más costoso. Tiene la ventaja de poder realizarse con el extracto de una mancha de sangre, aunque este sea turbio, y requiere de muy pequeña cantidad de muestra, pero su desventaja es que necesita  varias horas para que se efectúe la difusión.

¿Que es el fundamento quimico?. Tiene la ventaja de acelerar la difusión sobre el gel y por lo tanto disminuye el tiempo de reacción, además de ser más sensible que las otras técnicas, pero requiere un equipo más costoso. Tiene la ventaja de poder realizarse con el extracto de una mancha de sangre, aunque este sea turbio, y requiere de muy pequeña cantidad de muestra, pero su desventaja es que necesita  varias horas para que se efectúe la difusión. Las moléculas del anticuerpo (inmunoglobulina) reaccionan con el antígeno (proteína soluble) para formar un precipitado fácilmente visible bajo condiciones de luz apropiadas a las concentraciones equivalentes de antígeno y de anticuerpo. Las membranas de las células del organismo humano incluyendo los eritrocitos están formadas por varias capas de moléculas lipídicas, proteicas, y carbohidratos distribuidos en tal forma que permiten una separación entre el medio intracelular y el medio extracelular.

¿Que son los Factores que afectan la reacción de las precipitinas?. Edad de la muestra. Exposición al aire , a la luz solar y a la humedad. Altas temperaturas o grado de putrefacción. Contaminación con compuestos químicos o detergentes.

La TECNICA EN PLACA se refire Preparar una suspensión de glóbulos rojos al 10%. Como alternativa puede emplearse una suspensión al 35-45% en plasma del mismo paciente o sangre entera. 1) Colocar en una placa limpia y rotulada, una gota de Reactivo Anti-A, Anti-B o Anti-AB monoclonal y agregar al lado 1 gota de suspensión de glóbulos rojos. El gotero provisto dispensa un volumen de 50 ± 5 ul. Es importante que se mantenga la relación reactivo: células en todos los sistemas de ensayo. . Cierto. Falso.

Procedimiento de la técnica en placa. Mezclar el Reactivo y los glóbulos con un palillo descartable cubriendo un área circular de 2 cm de diámetro y balancear la placa continuamente durante 2 minutos. Observar aglutinación visible macroscópicamente hasta los 2 minutos. La observación puede facilitarse si se emplea una fuente de luz difusa. No debe emplearse microscopio. .

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS. Los hematíes aglutinan en segundos y permanecen aglutinados al balancear la placa. Indica la presencia del antígeno eritrocitario correspondiente. No se observa aglutinación a los 2 minutos, indicando ausencia del antígeno correspondiente.

TECNICA EN TUBO (por centrifugación) . A una gota de Reactivo Anti-A, Anti-B o Anti-AB monoclonal colocada en un tubo de hemólisis rotulado, agregar 1 gota de suspensión de glóbulos rojos al 3-5%. Mezclar e incubar durante 60 minutos a temperatura ambiente. Mezclar y centrifugar 20 segundos a 1000 rpm. . Agitar el tubo para resuspender las células y examinar macroscópicamente la aglutinación. Agitar el tubo para despegar las células y examinar macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación. .

TECNICA EN TUBO (por sedimentación). A una gota de Reactivo Anti-A, Anti-B o Anti-AB monoclonal colocada en un tubo de hemólisis rotulado, agregar 1 gota de suspensión de glóbulos rojos al 3-5%. Mezclar y centrifugar 20 segundos a 1000 rpm. . Mezclar e incubar durante 60 minutos a temperatura ambiente. Agitar el tubo para despegar las células y examinar macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación. Agitar el tubo para resuspender las células y examinar macroscópicamente la aglutinación.

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS. golpear suavemente el tubo para desprender el sedimento y examinar macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación. . no se observa aglutinación a los 2 minutos, indicando ausencia del antígeno corespondiente. La resuspensión de los glóbulos rojos es homogénea. . los hematíes aglutinan en segundos y permanecen aglutinados una vez resuspendidos. Indica la presencia del antígeno eritrocitario correspondiente.

¿A que se refiere la Técnicas de absorción-elución ?. Tiene como fundamento un primer proceso de absorción específico entre la mancha problema y su anticuerpo homólogo. Después de que la absorción es completada, el excedente de anticuerpos se elimina por medios de lavado por solución salina fría . El complejo antígeno, anticuerpo se disocia por calentamiento 56°C. El anticuerpo eluido se pone en contacto con eritrocitos lavados de propiedades antigénicas conocidas . Finalmente, la aglutinación indica la presencia de un antígeno de la misma especificidad que el de las células usadas como testigo o conocido .

¿A que se refiere la técnica de elución ?. La técnica de absorción elución es la más completa para la determinación de grupo ABO en manchas de sangre seca . También puede usarse para el sistema MN y para el sistema RH . Se tiene el inconveniente, en el caso del MN, de que sus antígenos son difícilmente detectables por la inespecificidad de la mala calidad de los sueros disponibles. En el caso del sistema RH, se requiere de mayores cantidades de muestra para estudiar el RH (Antígeno D) otros grupos  de sistemas y sus  cinco subgrupos. El anticuerpo eluido se pone en contacto con eritrocitos lavados de propiedades antigénicas conocidas .