TEMA 2: Técnicas bioquímicas
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 TEMA 2: Técnicas bioquímicas Descripción: Técnicas bioquímicas |
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La espectroscopía de absorción molecular mide: La luz emitida por átomos excitados. Con la luz despejada a 90°. La radiación absorbida por moléculas a una λ concreta. La masa/carga de los iones. En UV-visible la relación fundamental para cuantificar es: Ley de Raoult. Ley de lambr-Beer. Ley de Henry. Ley de Poiseuille. El IR cercano en el tema se usan principalmente para: Cuantificar concentraciones en suero. Identificar grupos funcionales (análisis cualitativo). Medir osmolaridad. Separar mezclas complejas. En EAA (absorción atómica) la fuente característica es: Lámpara de deuterio. Lámpara de cátodo hueco específica del elemento. Láser de diodo sintonizable. Lámpara de tungsteno-halógeno. Un ejemplo clínico de UV-visible en el documento es: Proteínas séricas. Densidad urinaria por refractometría. HbA1c por HPLC. Drogas por GC. En EAA la absorción se produce: En disolución acuosa a 25°C. En estado de vapor tras atomizar la muestra. En la fase estacionaria de una columna. Sobre un slide de química seca. La fotometría de llama mide: La luz absorbida por iones en solución. La luz emitida por átomos excitados en la llama. La luz reflejada por un slide. La masa de un ion en TOF. Según el temario, la fotometría de llamas se ha sustituido en gran parte por. Osmometría. Electrodos selectivos de ion. Refractómetría. MALDI-TOF. La luminiscencia, la fotoluminiscencia incluye: Fluorescencia y fosforescencia. Quimioluminiscencia y bioluminiscencia. Turbidimetría y nefelometría. Reflectancia y refractancia. La quimioluminiscencia se caracteriza por: Requerir luz UV externa. Emisión por reacción química sin luz externa. Escitación térmica a alta T. Depende del índice de refracción. Técnica más adecuada para inmunonálisis ultrasensibles (TSH, hCG). Turbidimetría. Quimioluminiscencia (CLIA). Refractometría. Osmometría. Turbidimetría vs. Nefelometría: la nefelometría mide preferentemente: Pérdida de luz en muestras concentradas. Luz dispersada en ángulo, útil en muestras diluidas. Absorbancia a λ máxima. Índice de refracción de la muestra. Un analito típico para turbidimetría en el documento: Inmunoglobulinas específicas. Proteínas séricas/urocultivos. Detección de Na+. HbA1c. La química seca (reflectancia) emplea: Reactivos líquidos y cubetas. Slides o tiras con películas multicapas de reactivos secos. Columnas de sílice C18. Lámparas de cátodo hueco. En química seca, la medida es: Transmitancia. Fluorescencia. Reflectancia de color generado. Masa/carga. Un uso típico de refractometría indicado: Detección de fármacos volátiles. Densidad urinaria y proteínas en plasma. Identificación bacteriana en minutos. Cuantificación de Na+ y K+. La espectrometría de masa se describe como: Espectroscópica, usa radiación visible. No espectroscópica; separa por m/z tras ionizar. Basada en reflectancia. Medición de índice de refracción. Una nota clave de espectrometría de masas: La muestra siempre se recupera intacta. La muestra se modifica y no se recupera (pero se usa muy poca). No permite análisis cualitativo. No sirve para fármacos. En microbiología clínica, MALDI-TOF: Identifica especies por espectro proteico en minutos. Mide resistencias antibióticas de forma directa siempre. Sólo sirve para virus. Requiere reactivos cromogénicos multicapas. La cromatografía: Identifica por sí sola sin detector. Sólo separa; necesita detector para identificar. Es exclusiva de gases. No sirve para aminoácidos. En CG la muestra debe ser: Iónica. Volátil o derivatizada para volatilizar. Proteica de alto PM sin tratamiento. Acuosa con sales. En HPLC: Fase móvil gas inerte; fase estacionaria sólida. Fase móvil líquida a alta presión; detectores UV/flúor/MS. No admite acoplar detectores. Es menos versátil que CG. El intercambio iónico se para por: Tamaño. Carga. Hidrofobicidad. Punto de ebullición. La exclusión molecular separa por: Carga neta. Peso/tamaño; moléculas grandes eluyen primero. Afinidad específica con ligando. Índice de refracción. La osmometría mide: Masa/carga. Osmolaridad aprovechando la ósmosis y equilibrio isotónico. Reflectancia en slides. Luz dispersada a 90°. |