EB - UT4: Ingeniería genética. Herramientas.

El ADN: Hasta 1970 era una molécula difícil de analizar por su gran longitud y monotonía. Actualmente ha pasado a ser una de las moléculas más fáciles de estudiar. Ambas son correctas. Ninguna es correcta.

Con las técnicas actuales es factible: Separar regiones determinadas del ADN. Obtenerlas pero solo en pequeñas cantidades. Determinar su secuencia de nucleótidos. Intercalar un segmento de ADN extraño en un ADN receptor, producir clones….

La INGENIERÍA GENÉTICA es: La tecnología de la manipulación genética de organismos con un propósito determinado. Tecnología de la manipulación y transferencia del ADN de unos organismos a otros, que posibilita la creación de nuevas especies, la corrección de defectos génicos y la fabricación de numerosos compuestos útiles. Ambas son correctas. Ninguna es correcta.

Composición de los ácidos nucleicos: Una pentosa, una base nitrogenada y un grupo fosfato. Una pentosa, una base fosfatada y un grupo nitrogenado. Una pentosa, una base fosfatada y un grupo amino. Una hexosa, una base nitrogenada y un grupo fosfato.

Los ácidos nucleicos: Son macromoléculas formadas por nucleótidos unidos por enlaces fosfodiéster. Pueden tener una base nitrogenada. Su pentosa es siempre una desoxirribosa. Ninguna es correcta.

Relaciona: DIANA. ENDONUCLEASAS DE RESTRICCIÓN. SITIOS DE RESTRICCIÓN.

Endonucleasas de restricción, señala la correcta: Hay caracterizadas más de un millar, aunque muchas reconocenla misma secuencia diana. Estas enzimas se aíslan de organismos procariotas como bacterias. Son estructuralmente sencillas, lo que facilita su aislamiento, conservación y manejo. Son todas correctas.

Señala la CORRECTA: Descubrimiento en 1950 al detectarse que algunas cepas bacterianas eran inmunes a la infección vírica. Un siglo más tarde de su descubrimiento se entendió el mecanismo. Arber, Smith y Nathans recibieron el premio Nobel en 1999.

Algunas bacterias producen una enzima que degrada el ADN «intruso», mientras que el propio está protegido porque las dianas de restricción están metiladas. Verdadero. Falso.

Las endonucleasas actúan como un mecanismo de defensa, para degradar material genético extraño que entre en la célula. Verdadero. Falso.

Las bacterias tienen la capacidad de metilar su ADN, lo cual sirve para distinguir entre el ADN extraño y el ADN propio. Verdadero. Falso.

Las enzimas de restricción pueden cortar ADN metilado, afectando solo de este modo al ADN extraño y no el ADN bacteriano. Verdadero. Falso.

Nomenclatura: EcoRV. E. co. R. V.

Tipos de enzimas de restricción: Tipo I. Tipo II. Tipo III.

Sobre las endonucleasas Tipo I y Tipo III, señala la CORRECTA: Son de restricción (cortan) y modificación (metilan). Solo requieren Mg2+ como cofactor y no necesitan energía. Cortan de manera consistente y predecible dentro de la secuencia que reconocen. Ninguna es correcta.

Sobre las endonucleasas Tipo II, señala la INCORRECTA: Son más sencillas y solo tienen actividad de restricción. Cortan de manera consistente y predecible dentro de lasecuencia que reconocen. Solo requieren Mg2+ como cofactor. Necesitan energía.

Tipo de corte de las endonucleasas: Se rompen 2 enlaces fosfodiéster de la cadena y de su complementaria, de tal manera que quedan dos extremos de ADN. Se rompen 2 enlaces fosfodiéster de la cadena y de su complementaria, de tal manera que queda un extremo de ADN. Se rompen todos enlaces fosfodiéster de la cadena y de su complementaria, de tal manera que quedan dos extremos de ADN. Ninguna es correcta.

TIPOS DE CORTE de las endonucleasas: Extremos romos. Extremos cohesivos.

Existen varios factores que son críticos al trabajar con enzimas de restricción y que pueden afectar la actividad de las mismas: Pureza del ADN: la reacción de enzimas es muy dependiente de lapureza. Contaminantes como proteínas, fenol, cloroformo, etanol,EDTA, SDS, altas concentraciones de sal, etc. inhiben la endonucleasa. Temperatura y pH. Las ADNasas: forman el ADN en presencia de Mg+2. La presión atmosférica.

Señala la CORRECTA sobre la unión del ADN: Se pueden unir fragmentos gracias a las enzimas que catalizarán la reacción de unión son las ADNligasas. Las ADN ligasas forman nuevos enlaces fosfodiéster en una reacción que no necesita energía u otro cofactor similar. El apareamiento de los extremos cohesivos dificultan mucho la reacción deligación. Los extremos romos se ligan con mayor eficiencia. Son todas correctas.

Unión de extremos cohesivos. Cuando tenemos fragmentos distintos de ADN que se han obtenido con igual enzima de restricción y, por lo tanto, sobre la misma secuencia de reconocimiento, nos vamos a encontrar con colas pegajosas complementarias en los extremos, y que por lo tanto podrán unirse mediante puentes de hidrógeno. Verdadero. Falso.

La actuación de la ADN ligasa permite la unión por puentes de hidrógeno de esos fragmentos de ADN cortados. Verdadero. Falso.

Unión de extremos romos. En el caso para facilitar su unión, primero han de ser modificados. A uno de los fragmentos se le añade una cola de poli-dA (cola de nucleótidos desoxiadenilato), y al otro se le añade una cola de poli-dT(cola de desoxitimilidato), se formarán dos colas complementarias, que podrán unirse mediante puentes de hidrógeno. Verdadero. Falso.