TDR cuestionarios

En el método de secuenciación de lon Torrent por semiconducción... Todas las respuestas son ciertas. Se cuantifican los cambios de pH producidos al añadir una base a la cadena creciente y liberar un H+. La eliminación de los nucleótidos no unidos se realiza mediante lavados. Se añaden los nucleótidos de forma secuencial.

Un gen de referencia o housekeeping gene es... un gen cuya expresión en la condición experimental no varía frente la condición control, y sirve para normalizar los resultados de la PCR a tiempo real. un gen que permite hacer una cuantificación absoluta, utilizando una recta patrón. un gen que siempre se mantiene estable, y sirve para normalizar los resultados de la transcripción reversa. un gen, la Ct del cual adquirirá el valor de 1, para que sirva de referencia para el gen de interés, que tendrá valores por encima o por debajo de 1.

En el método de secuenciación de Illumina (Solexa). Ninguna de las respuestas es cierta. Sólo necesitas utilizar los desoxinucleótidos marcados con fluorescencia, los didesoxinucleótidos no son necesarios. Sólo se utilizan nucleótidos terminadores marcados con fluorescencia. se utilizan tanto desoxinucleotidos como nucleótidos terminadores reversibles.

Cuando realizamos una PCR a tiempo real... ninguna de las respuestas es cierta. en la PCR a tiempo real solo se utiliza un cebador. los dos cebadores forward y reverse se unirán a la misma cadena. el cebador o primer forward se unirá a una de las cadenas y el reverse a la complementaria.

En el método de secuenciación de Rode 454 por pirosecuenciación... Se utilizan tanto desoxinucleótidos como didesoxinucleótidos. Se utilizan didesoxinucleótidos marcados con fluorescencia. Sólo necesitas utilizar los desoxinucleótidos, los didesoxinucleótidos no son necesarios. Ninguna de las respuestas es cierta.

En el método de secuenciación de lon Torrent por semiconducción... Se utilizan didesoxinucleótidos marcados con fluorescencia. Se utilizan tanto desoxinucleótidos como didesoxinucleótidos. Ninguna de las respuestas es cierta. Sólo necesitas utilizar los desoxinucleótidos, los didesoxinucleótidos no son necesarios.

En el método de secuenciación de Roche 454 por pirosecuenciación.. La eliminación de los nucleótidos no unidos la realiza la luciferasa. Ninguna de las respuestas es cierta. Se cuantifica la cantidad de luz emitida al añadir una base a la cadena creciente y liberar un PPi. Se añaden los nucleótidos todos a la vez.

En el método de secuenciación de Ilumina (Solexa)... Ninguna de las respuestas es cierta. Se detecta la adición de de un nucleótido por fluorescencia. Son necesarios lavados de la placa entre cada nucleótido añadido. Se detecta la adición de un nucleótido por luminiscencia.

En el método de secuenciación Sanger por electroforesis capilar... Se utilizan tanto desoxinucleótidos como didesoxinucleótidos. No se utilizan didesoxinucleótidos marcados con fluorescencia. Sólo necesitas utilizar los didesoxinucleótidos marcados con fluorescencia, los desoxinucleótidos no son necesarios. Ninguna de las respuestas es cierta.

Para cuantificar la expresión de un gen por RT-PCR a tiempo real... Sabremos si un gen se sobreexpresa o está reprimido. Utilizamos el método de cálculo delta-delta Ct. Necesitamos comparar la condición problema con la control. todos las respuestas son ciertas.

Si utilizamos un vector derivado del fago P1... el sitio pac es reconocido por la enzima pacasa y servirá para el empaquetamiento del DNA en la cabeza del fago. la union de los dos brazos cortos a los exremos del inserto da lugar a un DNA recombinante que podrá ser empaquetado. todas las respuestas son ciertas. la union de dos brazos largos a los extremos del inserto da lugar a un DNA recombinante que no podrá ser empaquetado.

entre las características esenciales de los vectores de clonación encontramos... todas las respuestas son ciertas. que contenga dianas de restricción únicas. contiene elementos para la selección de las bacterias transformadas. contiene su propio origen de replicación.

Los vectores derivados de fagos filamentosos como M13 o f1... son muy útiles cuando se requiere secuenciar el DNA recombinante porqué permiten la obtención del DNA de cadena sencilla. se suelen usar para el empaquetamiento in vitro mezclando extractos de proteínas de la cápside y la cola de los fagos. no permiten la obtención de la molécula de DNA recombinante en forma de doble cadena. provocan lisis celular y por eso los podemos aislar del medio.

Entre las características de los fagémidos encontramos... Son plásmidos a los que se les ha incorporado el origen de replicación de un fago filamentoso como el fago M13 o f1. Sólo necesitan contener el origen de replicación del plásmido. han perdido la capacidad de producir ADN monocatenario de los fagos filamentosos. ninguna de las respuestas es cierta.

con la técnica cell surface display... podemos producir vacunas orales. todas las respuestas son ciertas. podemos hacer estudios de afinidad de proteínas por sus receptores. podemos producir bioadsorbentes sin necesitar organismos enteros.

Los plásmidos pUC presentan ventajas frente a otros como pBR322 porque... contienen un gen que confiere resistencia a la ampicilina. todas las respuestas son ciertas. contienen un sitio de clonación múltiple (MSC). contienen un origen de replicación para procariotas.

en la replicación por Rolling circle (o circulo rodante)... la endonucleasa A reconoce el sitio COS y cortará para producir DNA fágicos independientes que serán empaquetados. primero se produce un corte en una de las cadenas de DNA por una nucleasa para iniciar la replicación. todas las respuestas son correctas. la replicación se produce un concatámero de DNAs fágicos.

para introducir el DNA recombinante a partir de un vector tipo cósmido en una célula solemos... ninguna de las respuestas es correcta. permeabilizando la membrana plasmática mediante métodos químicos. realizar empaquetamiento in vitro. introducirlos por electroporación.

la secuencia del factor Xa que se encuentra a veces detrás de una etiqueta (Tag) en un vector de expresión... es una región de reconocimiento por proteasas. ninguna de las respuestas es cierta. permite la unión de la etiqueta a una columna de cromatografía por afinidad. es una región de reconocimiento por nucleasas.

los cromosomas artificiales de levadura... ninguna de las respuestas es cierta. contienen origen de replicación autónomo ARS1, centrómero y un marcador de selección en alguno de los brazos del cromosoma. contienen origen de replicación autónomo ARS1, centrómero, telómeros y un marcador de selección en alguno de los brazos del cromosoma. contienen origen de replicación autónomo ARS1, centrómero, telómeros y un marcador de selección en cada brazo del cromosoma.

queremos clonar una serie de fragmentos de DNA en E.Coli. Dadas las características de cada inserto, elige el vector más adecuado para clonar. 1. inserto de 350 kb. 2. inserto que después queremos secuenciar. 3. insertos que formarán una librería de genoma eucariótico. 1: BAC, 2: cósmido, 3. fagémido bluescript. 1: BAC, 2: fagémido, 3. cósmido. 1: vector derivado de lambda, 2: fagémido, 3. vector derivado de M13. 1: vector derivado de lambda, 2: fagémido bluescript, 3. cósmido.

os vectores derivados del fago lambda por sustitución... no tienen restricción de tamaño porqué sustituyen regiones del propio fago. no requieren el uso de enzimas de restricción para incorporar el DNA. pueden admitir insertos de DNA más grandes que los vectores de inserción. ninguna de las respuestas es cierta.

Las enzimas de restricción tipo II... son diseñados por ingeniería genética para cortar el DNA por donde decida el investigador. las secuencias de reconocimiento están alejadas de la zona de corte. necesitan ATP para realizar el corte o rotura del enlace fosfodiéster. todas las respuestas son falsas.

el tratamiento con el enzima fosfatasa se utiliza cuando cortamos el vector y e inserto con enzimas de restricción... para tratar los insertos y evitar que formen concatámeros que se empaquetarían. como a estrategia para evitar que fragmentos de DNA, inserto o vector, se vuelvan a unir entre sí. para añadir los grupos fosfato que han estado previamente eliminados y permitir que se puedan unir fragmentos de DNA. nunca, ya que entonces inserto y vector no se podrían unir entre sí.

los enzimas de restricción... ninguna de las respuestas es cierta. reconocen secuencias concretas del DNA de doble cadena. reconocen secuencias concretas del DNA de cadena simple. reconocen y cortan secuencias de DNA de cadena simple.

las DNA ligasas... es capaz de unir extremos de cadenas sencillas de DNA. une extremos que forman parte de una doble cadena. generan un enlace peptídico entre las bases. ninguna de las respuestas es cierta.

las enzimas de restricción... diferentes enzimas de restricción pueden reconocer las mismas secuencias pero generar extremos incompatibles. cortan el DNA generando extremos cohesivos o romos. diferentes enzimas de restricción pueden reconocer secuencias diferentes pero generar extremos compatibles. todas las respuestas son ciertas.

los mapas de restricción... sirven para averiguar la secuencia de la diana de restricción gracias a la electroforesis. para resolverlo completamente tan solo es necesario separar los fragmentos generados por las digestiones individuales de las enzimas. sirven para averiguar cuantas dianas de restricción hay en un vector para un enzima de restricción determinado. ninguna de las respuestas es cierta.

las DNA ligasas... ninguna de las respuestas es cierta. unen un extremo 3'P con uno 5'OH. son mucho mas eficientes uniendo extremos cohesivos que extremos romos. no necesitan aporte de energía para reparar el esqueleto carbonado del DNA.

las enzimas de restricción... son enzimas que en la naturaleza protegen a las bacterias de infecciones víricas. todas las respuestas son ciertas. no son capaces de cortar una diana de restricción que esté metilada. tienen una enzima "hermano" que en vez de cortar, metila el DNA en la secuencia diana.

si utilizamos el plásmido pBR322 para clonar un fragmento de ADN, y hacemos una selección por replica-plating seleccionando aquellas colonias que han crecido en una placa con ampicilina pero que no han crecido en placas con tetraciclina, el fragmento clonado lo hemos introducido... el lugar de múltiple clonación. con este plásmido no se puede hacer este tipo de selección. en el interior de la región que proporciona resistencia a tetraciclina. en el interior de la región que proporciona resistencia a ampicilina.

la lipofection es un método... para introducir ADN en células eucariotas, basado en vesículas de lípidos catiónicos. para introducir ADN en procariotas, basado en vesiculas de polímeros aniónicos. poara introducir ADN en células, basado en la infección por virus (que se adhieren a la bicapa lipídica). para introducir lípidos en células, basado en la creación de microporos en la membrana.

para introducir el DNA recombinante a partir de un vector tipo cósmido en una célula solemos... introducirlos por electroporación. realizar empaquetamiento in vitro. ninguna de las respuestas anteriores es cierta. utilizar el método del cloruro de calcio.

el método de selección usando el fenotipo SPI... sirve para introducir ADN en procariotas, basado en fagos que carecen de dos genes involucrados en la recombinación e inserción una vez introducido el inserto. se basa en que el fago lambda no puede infectar células de E.Coli que posean un profago lítico conocido como P2. se basa en la compatibilidad de dos fagos que coexisten en E.Coli y se complementan. ninguna de las respuestas es cierta.

la técnica de fusión de protoplastos... todas las respuestas son ciertas. el primer paso es eliminar las paredes celulares mediante tratamiento enzimático. sirve para fusionar una célula procariota con una eucariota. necesita aplicar un campo eléctrico para que se produzca la fusión.

indica cual de las respuestas es falsa sobre los métodos de selección por inactivación de un marcador... si se utiliza el Gen LacZ la inserción de un fragmento produce la activación del operón. los marcadores comúnmente usados son genes que confieren resistencia a antibióticos. la mayoría de los vectores de clonación son diseñados de manera tal que la inserción de un fragmento de ADN dentro del plásmido destruye la integridad de uno de los genes presentes en ese vector. este método detecta la usencia de una característica que antes sí estaba presente.

en el empaquetamiento in vitro el DNA... necesitamos todas las proteínas de la cápside y la cola en una solución. todas las respuestas son ciertas. una endonucleasa reconocerá uno de los extremos del DNA y lo introducirá en la cápside. pretendemos introducir el DNA en una partícula que posteriormente inyecte el DNA a una célula.

una de las técnicas de la selección de fagos recombinantes es la selección sobre el tamaño del fago lambda. Indica cual de las respuestas es falsa. el uso de esta técnica requiere que el vector contenga al menos tres sitios COS. la inserción del vector en el fago se realiza mediante empaquetamiento in vitro. esta técnica se utiliza cuando el objetivo es crear una librería genética. una de las ventajas de la técnica es que se previene la auto-ligación del vector sin inserto.

una desventaja de la técnica de electroporación es... que es necesario tener un aparato específico para crear el campo eléctrico. todas las respuestas son ciertas. que puede provocar daño celular. que puede causar transporte inespecífico a través de la membrana celular.

indica cual de las afirmaciones es falsa sobre los métodos de transfección celular para introducir el DNA recombinante en una celula. en los métodos químicos el DNA entra en la célula por endocitosis. en los métodos físicos el DNA entra en la célula mecanicamente. el método del DEAE dextrano tiene alta eficiencia pero requiere aparataje complejo. un método barato y sencillo aunque con baja eficiencia es el del fosfato de calcio.

Lambda ZAP II tiene la ventaja sobre otros fagos lambda que permite la manipulación posterior como en un plásmido. verdadero. falso.

si se ha utilizado Lambda ZAP II como fago lambda para hacer librerías, no se puede utilizar como plásmido. verdadero. falso.

Lambda ZAP II contiene las regiones de inicio y terminación de síntesis de DNA (que se encuentran en la región f1), regiones reconocidas por la célula huesped, que tiene la maquinaria para hacer la escisión del plásmido. verdadero. falso.

Lambda ZAP II permite hacer la selección del DNA recombinante añadiendo IPTG y X-Gal al medio. verdadero. falso.

Lambda ZAP II no se puede utilizar para obtener DNA de cadena sencilla. verdadero. falso.

con tal de escindir el pBluescript, es importante que la cepa huesped no contenga el episoma F', ya que sino tendremos contaminación del fago auxiliar. verdadero. falso.

el vector Lambda ZAP II tiene origen de replicación de plásmido y de fago. verdadero. falso.

Lambda ZAP II se puede usar para hacer librerías genómicas, ya que tendrá una elevada eficiencia de transformación. verdadero. falso.

algunos vectores de levaduras deben replicarse en E.Coli... siempre que sean vectores que se integran en ele genoma de la levadura. todas las respuestas son ciertas. antes de transformarlos en levaduras. para aumentar su número de copias.

para expresar una proteína recombinante en plantas hay que usar un promotor... constitutivo como el GAL. inducible, como los promotores de los genes de opinas OCS o Nos. fuerte y útil en cualquier tipo de plantas, como el de la actina-1. ninguna de las respuestas es cierta.

para insertar un gen mediante gene targeting en levaduras... es necesario que el gen esté flanqueado por dos regiones de selección para la levadura. no se puede hacer gene targeting en levaduras. es necesario que el inserto esté flanqueado por dos regiones de recombinación homóloga para un gen esencial para el crecimiento de la levadura. es necesario que el inserto esté flanqueado por dos regiones de recombinación homóloga para un gen de la levadura.

los YACs suelen contener dos marcadores de selección como TRP y URA para: ninguna de las respuestas es cierta. poder seleccionar las levaduras que han adquirido el vector recombinante. En este caso se utilizaría un medio mínimo sin uracilo ni triptófano. poder seleccionar las levaduras que han adquirido el vector recombinante. En este caso se utilizaría un medio mínimo pero con uracilo y triptófano. poder seleccionar las levaduras no recombinantes.

en la técnica Reverse-two-hybrid... la supervivencia de las levaduras es debido a u tercer compuesto que interrumpe la interacción entre el bait y el prey. son necesarios el binding domain y el activating domain unidor respectivamente a el cebo y la presa. todas las respuestas son ciertas. se detecta la mortalidad de las levaduras sometidas al proceso cuando hay interacción entre las proteínas testadas.

un vector tipo Mini Ti... necesita un fago Ti helper para infectar a Agrobacterium tumefaciens. ninguna de las respuestas es cierta. necesita un fago Ti helper para que la planta pueda ser transformada. contiene los mismos elementos que un vector desarmado derivado del plásmido Ti pero admite insertos más pequeños.

en las plantas, la introducción de un nuevo DNA se puede realizar mediante... vectores basados en plásmidos naturales de bacterias. transferencia indirecta de genes. mediante el método de choque térmico + cloruro de calcio con protoplastos. vectores basados en virus de bacterias.

sabiendo que la imagen refleja la técnica de yeast two hybrid, identifica cada elemento de la figura: 1.Prey/presa; 2.Gal4 BD; 3.Gal4 AD; 4.Cebo/bait; 5.Fragmento insertado. 1.Gal4 BD; 2.Cebo/bait; 3.Prey/presa; 4.Gal4 AD; 5.Gen reportero. ninguna de las anteriores. 1.Gal4 BD; 2.Prey/presa; 3.Cebo/bait; 4.Gal4 AD; 5. Fragmento insertado.

en la expresión de proteínas recombinantes en levaduras: es necesario introducir el gen de interés en el vector junto a un promotor fuerte y regulable. algunos de los promotores más usados son GAL1, AOX1 o LAC4. es necesario introducir el gen de interés junto a un promotor fuerte y regulable en el genoma de la levadura, si usamos vectores de integración cromosómica. todas las respuestas son ciertas.

un vector desarmado derivado del plásmido Ti... se le han eliminado los genes Vir, pero mantiene el origen de replicación en plantas. se le han eliminado los genes Vir, pero mantiene el origen de replicación en bacterias. contiene la región con los genes Vir, pero se le han eliminado los oncogenes. contiene la región con oncogenes y genes de la síntesis de opinas, pero se le han eliminado los genes Vir.

la ingeniería genética en plantas... permite producir proteínas humanas utilizando las plantas como bioreactores. facilita el estudio básico del metabolismo de las plantas. permite modificar las características de cultivos para favorecer la industria tecnoalimentaria. todas las respuestas son ciertas.

se pueden modificar las características de los cultivos de plantas para mejorar sus propiedades... creando plantas transgénicas por adición de nuevos genes. creando plantas transgénicas pro inactivación de genes. aplicando la tecnología antisentido. todas son ciertas.

la técnica para introducir ADN en plantas mediante el bombardeo con microproyectiles se llama: no existe esta técnica. biolística. phitoshooting. DNA shooting.

¿Qué ventaja presenta la expresión de una proteína humana en Pichia pastoris frente la expresión en un sistema procariota?. no presentan ninguna ventaja especial. que P.Pastoris es una levadura y por lo tanto puede hacer modificaciones típicas de organismos eucariotas como glicosilación. que los procariotas no pueden expresar proteínas humanas en grandes cantidades. que P.Pastoris es una línea celular humana, y por tanto la proteína expresada segura que será funcional.

¿Por qué el promotor AOX1 es uno de los más utilizados en la clonación en levaduras? Indica cual de las respuestas es falsa. por que es un promotor fuerte. por que es regulable, inhibición por glucosa y su inductor es el metanol. por que su regulación se produce mediante compuestos químicos baratos. por que es un promotor constitutivo muy estable.

¿Con qué enzima de restricción realizarías los cortes en este vector?. primero con BamHI para introducir el inserto y después con HindII. primero con Xhol y después con Sal I para introducir el inserto. ninguna de las opciones es válida. con Sal I, para introducir el inserto, y con BamHI.

¿Qué tipo de vector es el plásmido de la imagen?. Cromosoma artificial de levaduras (YACp). Vector de integración cromosómica (YIp). Plásmido Centrómero de levaduras (YCp). Plásmido Episomal de levaduras (YEp).

El gen gfp... ninguna de las respuestas es cierta. codifica para la gene failure protein, y sirve como gen de selección negativa en células animales ya que produce un compuesto tóxico por éstas. codifica para la green fluorescent protein, y sirve como gen de selección negativa en celulas animales ya que produce un compuesto tóxico por éstas. codifica para la green fluorescent protein, y sirve como gen reportero o señal de células animales ya que produce fluorescencia.

indica cuál de las afirmaciones es falsa sobre la ingeniería genética en células eucariotas. los retrovirus sólo pueden utilizarse con células huésped en división. los vectores para eucariotas no contienen genes de resistencia a antibióticos. existen dos tipos de transfección: transitoria y estable. el uso de retrovirus requiere una transformación previa de bacterias.

¿Cuál de los siguientes métodos no sirve para introducir ADN en células animales?. infección vírica. electroporación. todos ellos sirven. reactivos químicos basados en polímeros.

los sistemas de selección que utilizan células huésped Tk- (Tk deficientes) o HPRT- (HPRT deficientes) se basan... todas las respuestas son ciertas. en que los genes de la vía de síntesis de nucleótidos de rescate estén contenidos en el vector. en el bloqueo por aminooterina de la vía de síntesis de nucleótidos de novo. en que la célula huésped no contenga los genes necesarios para la síntesis de nucleótidos por la vía de rescate.

En los vectores víricos dependientes de auxiliar para transformar células eucariotas, se han sustituido genes necesarios para la infección. Hace falta un vector auxiliar que contenga estos genes. Las funciones que faltan podrían aportarse: todas las respuestas son ciertas. mediante el uso de células empaquetadoras. mediante co-infección con virus que contienen vectores auxiliares modificados para que no puedan completar su ciclo infeccioso. mediante transfección de las células con un plásmido auxiliar.

¿Cuál es la principal ventaja del uso de células empaquetadoras de DNA vírico recombinante?. la producción de virus capaces de infectar la célula diana y por lo tanto introducir su DNA, pero sin capacidad de producir nuevas partículas víricas infectivas en esta célula huésped. que el proceso es menos laborioso. ninguna de las anteriores. los sistemas de selección directos de células recombinantes a partir de los genes incluidos en el vector vírico.

sistemas de selección en eucariotas se basan en vectores que contienen secuencias de DNA que codifican para: todas las anteriores. antibióticos. genes reporteros. tóxicos.

en un sistema de retrovirus para introducir ADN en células animales, las proteínas gag y pol se expresarán... en la célula de interés, ya que son necesarios para la expresión de la proteína clonada. en E.Coli, pero en células animales ya no, porque se formarían virus infectivos. en las células empaquetadoras, para producir virus que puedan transducir el ADN a la célula huésped. no se expresarán nunca al usar este sistema, ya que son prescindibles para clonar un inserto en la célula de interés, solo son necesarios para el ciclo lítico.

los plásmidos no replicativos... no tienen ningún origen de replicación en procariotas, el inserto se expresa sólo un periodo corto de tiempo. no tienen ningún origen de replicación en eucariotas, el inserto se expresa de manera transitoria, y a la larga los plásmidos se pierden. no tienen ningún origen de replicación, se basan en su integración al cromosoma para que se exprese el inserto. tienen origen de replicación de BPV, pero este no es funcional en eucariotas y por eso se llaman no replicativos.

de forma general y simplificada, ¿en qué orden deben aplicarse las diferentes técnicas al utilizar vectores virales para transfretar una célula eucariota?. creación de un vector recombinante; clonación en E.Coli; selección bacterias recombinantes y purificación del vector; producción de partículas víricas; introducción del vector en células empaquetadoras; infección célula eucariota diana. creación de un vector recombinante; selección bacterias recombinantes y purificación del vector; clonación en E.Coli; producción de partículas víricas; introducción del vector en células empaquetadoras; infección célula eucariota diana. ninguna de las respuestas es cierta. creación de un vector recombinante; clonación en E.Coli; selección bacterias recombinantes y purificación del vector, Co-transformación del vector vírico con un vector helper en células que permitan la encapsulación del DNA vírico; producción de partículas víricas; infección célula eucariota diana.