tecnicas de hibridacion de acidos nucleicos

¿qué factor influye más en la temperatura de fusión (Tm) de moléculas de ADN muy largas?. La longitud total de la cadena. La concentración iónica del medio. La composición de bases, especialmente el contenido de GC. La presencia de agentes químicos desnaturalizantes.

Cuál de las siguientes afirmaciones describe correctamente el efecto hipercrómico observado durante la desnaturalización del ADN?. La absorbancia a 260 nm disminuye porque las bases quedan protegidas en la doble hélice. La absorbancia a 260 nm aumenta porque las bases quedan expuestas como cadenas sencillas. La absorbancia a 260 nm se mantiene constante ya que la longitud de onda no afecta al ADN. La absorbancia a 260 nm varía aleatoriamente sin relación con la estructura de la cadena.

En el experimento de renaturalización mixto con ADN marcado con dos isótopos diferentes, ¿qué porcentaje de los dúplex resultantes tendrá una hebra con cada isotopo?. 25 %. 33 %. 50 %. 75 %.

En la curva de fusión descrita, ¿en qué tramo se observa una pendiente lineal seguida de una curva convexa, correspondiente a la fase en la que se separan progresivamente las dobles hebras?. El primer tramo, plano, antes de iniciar el calentamiento. El segundo tramo, que inicia con curva cóncava y pasa a lineal. El tercer tramo, de absorción máxima constante. No se describe ningún tramo con esas características.

¿Cuál de las siguientes afirmaciones sobre los requisitos de renaturalización del ADN es correcta?. La concentración de NaCl debe estar entre 0,15 y 0,5 M para reducir la repulsión del fosfato. La temperatura óptima de renaturalización es de 10 a 15 °C por encima de la temperatura de fusión (Tm). La ​​alta complejidad molecular del genoma acelera la velocidad de renaturalización. La baja concentración de sal mejora la estabilidad del apareamiento de bases.

En el método de traducción de mellas(nick traslation) para etiquetar sondas de ADN, ¿Qué actividad específica de la ADN polimerasa I es responsable de eliminar nucleótidos de la cadena original a medida que la mella se mueve a lo largo del ADN?. Actividad de la exonucleasa 5'→3'. Actividad de la exonucleasa 3'→5'. Actividad de la polimerasa 5'→3'. Actividad de la transferasa terminal.

Según la descripción del tampón de hibridación, ¿cuál de los siguientes componentes NO pertenece a la solución de Denhardt's (100×) utilizada en la mezcla?. BSA. Ficoll. PVP. Heparina.

si el Tm calculado de un híbrido es de 80 ºC y el tampón de hibridación contiene un 30 % de formamida, ¿Cuál es la temperatura de hibridación que se debe usar aproximadamente?. 58 ºC. 68 ºC. 72 ºC. 80 ºC.

¿Cuál de los siguientes cambios aumentaría la astringencia durante la fase de hibridación?. Aumento de la temperatura durante la fase de hibridación. Disminución de la temperatura durante la fase de lavado. Aumento de la concentración de sales del tampón SSC durante la hibridación. Disminución del porcentaje de SDS en la solución de lavado.

Según la descripción del experimento, ¿Qué característica del patrón de visualización en el transiluminador permite distinguir que el ADN presente en el gel es genómico y no plasmídico después de la digestión?. La aparición de un smear intenso concentrado en la zona superior del gel. La presencia de un único fragmento de alta molecularidad. Un patrón de bandas discretas y bien definidas. La ausencia total de señal fluorescente bajo el transiluminador.

Sobre la temperatura de fusión (Tm) del ADN, es correcto afirmar que: Depende únicamente de la longitud de la molécula. En moléculas grandes, la Tm depende sobre todo del porcentaje GC. Las moléculas ricas en AT tienen una Tm más alta. La Tm no influye en las técnicas de hibridación.

Durante la renaturalización del ADN: Siempre se vuelven a unir las hebras originales. El proceso es dirigido y específico. La concentración de ADN no influye en la velocidad. La renaturalización depende de colisiones aleatorias entre hebras.

En FISH en interfase, una ventaja clave frente a FISH metafásica es que: Tiene mayor resolución estructural. Permite estudiar todo el genoma sin sondas específicas. No requiere cultivo celular. Detecta traslocaciones sin sondas LSI.

Las sondas centroméricas (CEP): Reconocen secuencias únicas del genoma. Se utilizan principalmente para alteraciones estructurales complejas. Se unen a regiones repetidas del centrómero. Son específicas de un gen concreto.

En una estrategia de FISH de fusión (dual fusion): La traslocación se detecta porque las señales se separan. En células normales se observan señales fusionadas. La traslocación produce señales colocalizadas (amarillas). No es necesario conocer los cromosomas implicados.

En una estrategia FISH “split” (break-apart): Las señales separadas indican normalidad. Las señales separadas indican rotura del gen. Solo se usa cuando se conocen ambos cromosomas implicados. No se utiliza en cáncer.

La técnica CGH convencional permite detectar: Traslocaciones equilibradas. Inversiones cromosómicas. Pérdidas y ganancias de material genético. Mutaciones puntuales.

En CGH, un cromosoma que aparece amarillo indica que: Existe una deleción. Existe una amplificación. El ADN problema está dañado. No hay diferencias entre muestra y control.

Una limitación importante del CGH y del aCGH es que: Requieren cultivo celular. No detectan cambios en el número de copias. No detectan traslocaciones equilibradas. Solo pueden usarse en cáncer.

En los biochips o microarrays: La diana está fijada al soporte y la sonda está marcada. Se realiza una hibridación inversa. Solo se pueden estudiar uno o dos genes. No requieren análisis informático.