Vectores de Clonamiento y Expresión en Procariotas y Eucariotas

¿Cuál es la función principal de un vector de clonamiento en ingeniería genética?. Unir fragmentos de ADN. Introducir ADN exógeno en una célula huésped. Amplificar el ADN de una célula. Secuenciar el ADN. Realizar la transcripción inversa.

¿Qué es un plásmido?. Una proteína esencial para la replicación celular. Una molécula de ARN mensajero. Una pequeña molécula circular de ADN que se replica independientemente del ADN cromosómico. Un orgánulo celular responsable de la síntesis de proteínas. Un tipo de virus que infecta bacterias.

¿En qué tipo de organismos se encuentran comúnmente los plásmidos?. Solo en eucariotas. Solo en procariotas. En bacterias, arqueas y algunos eucariotas. Exclusivamente en plantas. En todos los organismos vivos.

¿Cuál fue la relevancia histórica del plásmido R pSC101 en biotecnología?. Fue el primer plásmido en ser descubierto. Permitió la creación del primer ADN recombinante. Confirió resistencia a todos los antibióticos conocidos. Se utilizó para la secuenciación completa del genoma bacteriano. Fue fundamental para el desarrollo de la PCR.

¿Qué es una 'cassette de expresión' en el contexto de vectores genéticos?. Una secuencia de ADN que codifica para una proteína de resistencia a antibióticos. Una región del ADN que regula la replicación del plásmido. Un conjunto de elementos genéticos (promotor, gen de interés, terminador) necesarios para la expresión génica. Una secuencia utilizada para marcar el plásmido para su purificación. Un sitio específico para la recombinación sitio-específica.

¿Cuál es la diferencia principal entre una cassette de expresión procariota y una eucariota en términos de elementos regulatorios?. Las procariotas tienen un promotor y un terminador, mientras que las eucariotas solo tienen un promotor. Las procariotas incluyen un RBS (Ribosome Binding Site) y un CDS (Coding Sequence), mientras que las eucariotas incluyen un intrón y una señal de Poli-A. Las eucariotas usan promotores fuertes, mientras que las procariotas usan promotores débiles. No hay diferencias significativas; ambos sistemas utilizan promotores y terminadores. Las procariotas requieren un sitio de replicación, mientras que las eucariotas no.

¿Qué tipo de vector genético es generalmente más adecuado para transferir genes a células no divididas?. Plásmidos/liposomas. Adenovirus. Virus adeno-asociados (AAV). Lentivirus. Retrovius.

¿Cuál es una desventaja principal de los vectores retrovirales y lentivirales para la terapia génica?. Su baja capacidad de carga génica. Su incapacidad para infectar células no divididas. El riesgo de mutagenesis insercional. Su alta inmunogenicidad. La expresión transitoria que producen.

¿Qué elemento en un vector de clonamiento es esencial para su replicación dentro de la célula huésped?. El promotor. El gen de resistencia a antibióticos. El sitio de clonamiento múltiple. El origen de replicación (Ori). El terminador.

¿Qué es un 'sitio de clonamiento múltiple' (MCS) en un vector?. Una región donde se encuentran múltiples genes de interés. Una secuencia que permite la inserción de ADN en varios puntos del vector. Una serie de sitios de restricción cercanos entre sí, que facilitan la inserción de un gen de interés. Una región necesaria para la expresión génica en eucariotas. Un sitio que confiere resistencia a varios antibióticos.

¿Cuál es la función del promotor en un vector de expresión?. Terminar la transcripción. Unir los ribosomas para la traducción. Iniciar la transcripción del gen de interés. Seleccionar las células transformadas. Replicar el ADN del vector.

En el contexto de promotores eucariotas, ¿qué tipo de expresión se asocia comúnmente con promotores como CMV, EF1a y SV40?. Expresión inducible. Expresión reprimida. Expresión constitutiva. Expresión tejido-específica. Expresión transitoria.

¿Qué promotor procariota es conocido por su fuerte regulación por el operador lac y puede ser inducido por IPTG?. Promotor T7lac. Promotor trp. Promotor lac. Promotor Ptac. Promotor de E. coli.

¿Qué técnica de ensamblaje de ADN utiliza enzimas de restricción tipo IIs para crear uniones sin sitios de restricción en el producto final?. Clonación por PCR. Gibson Assembly. Golden Gate Assembly. Gateway Assembly. Ligación de extremos romos.

¿Cuál es una característica clave de las enzimas de restricción tipo IIs en comparación con las tipo II?. Cortan dentro de su sitio de reconocimiento. Producen extremos romos siempre. Su sitio de reconocimiento es palindrómico. Cortan fuera de su sitio de reconocimiento. Son utilizadas principalmente en eucariotas.

En el ensamblaje Golden Gate, ¿qué enzima es responsable de unir los fragmentos de ADN cortados?. Enzima de restricción tipo IIs. ADN polimerasa. ADN ligasa. Transcriptasa inversa. ARN polimerasa.

¿Qué método de ensamblaje de ADN utiliza una reacción simultánea de exonucleasa, polimerasa y ligasa para unir fragmentos de ADN con solapamientos de ~25 pb?. Golden Gate Assembly. Gibson Assembly. Gateway Assembly. Clonación por Ligasas. Clonación por PCR.

¿Cuál es el objetivo principal del sistema Gateway®?. Clonar genes en plásmidos de forma rápida y eficiente. Permitir la transferencia bidireccional de genes entre diferentes vectores. Facilitar la clonación sitio-específica de fragmentos de ADN en múltiples vectores de expresión. Generar bibliotecas de ADN a gran escala. Realizar ediciones genómicas precisas.

¿Qué son los sitios 'attB' y 'attP' en el contexto del sistema Gateway®?. Secuencias de reconocimiento para enzimas de restricción. Sitios de origen de replicación. Secuencias de recombinación sitio-específica que interactúan durante la transferencia de genes. Regiones promotoras fuertes para la expresión génica. Sitios de terminación de la transcripción.

¿Cuál es una ventaja de utilizar clonación recombinacional (como Gateway®) sobre la clonación tradicional con enzimas de restricción y ligasa?. Es más rápida y genera menos subproductos. Permite la clonación sin necesidad de sitios de restricción predefinidos. Es altamente eficiente y direccional, minimizando la necesidad de screening. Permite la inserción de fragmentos de ADN muy grandes. No requiere transformación celular posterior.