Western Blot

¿Qué moléculas puede separar y transferir la técnica de blotting?. Solo ADN. Solo proteínas. ADN, ARN o proteínas. Solo ARN.

¿Qué técnica fue descubierta por E.M. Southern en 1975?. Northern blot. Western blot. Southern blot. Dot blot.

El **Southern blot** se utiliza para: Detectar proteínas. Analizar ARN. Detectar un gen específico en ADN. Medir actividad enzimática.

En el **Northern blot**, la molécula analizada es: ADN. ARN. Proteínas. Lípidos.

El **Western blot** fue desarrollado en: Harvard. Stanford. Cambridge. MIT.

El Western blot se basa en la interacción: Enzima-sustrato. Antígeno-anticuerpo. ADN-polimerasa. ARN-ribosoma.

Paso inicial del Western blot: Electrotransferencia. Procesamiento de proteínas. Hibridación con anticuerpos. Revelado.

Un homogeneizador Dounce es ideal para: Tejido animal duro. Células frágiles. Levaduras. Bacterias Gram negativas.

El método de perlas de vidrio se usa para romper: Células animales. Levaduras. Tejido vegetal. Virus.

Para un lisado total de proteínas, se utilizan detergentes como: SDS. Triton, NP-40, RIPA. Etanol. Metanol.

En la electroforesis de proteínas, el detergente **SDS** cumple la función de: Mantener proteínas nativas. Desnaturalizar y linealizar proteínas. Proveer color. Reducir enlaces disulfuro.

El **Beta Mercaptoetanol** o **DTT** se emplean como: Agentes oxidantes. Agentes reductores. Tintes colorimétricos. Agentes de transferencia.

¿Qué componente del tampón de carga da densidad para que la muestra se hunda en el pocillo?. Azul de Bromofenol. Tris. Glicerol. SDS.

En la polimerización del gel, el TEMED actúa como: Radical libre. Catalizador de polimerización. Agente desnaturalizante. Solvente.

¿Qué tinciones permiten visualizar todas las proteínas en una membrana?. Coomassie o Ponceau. Hematoxilina. Safranina. Azul de toluidina.

El soporte más usado para transferencia de proteínas es: Papel filtro. Membrana de nitrocelulosa. Cristal. Agar.

La transferencia de proteínas del gel a la membrana se realiza mediante: Cromatografía. Electrotransferencia. Centrifugación. Difusión simple.

¿Qué ocurre en el paso de bloqueo?. Se desnaturalizan proteínas. Se saturan sitios no específicos. Se activan enzimas. Se corta el ADN.

En la detección directa, se utiliza: Anticuerpo primario marcado. Anticuerpo secundario + enzima. Colorantes inespecíficos. Fluorescencia indirecta.

En la detección indirecta, se emplea: Solo anticuerpo primario. Anticuerpo primario y secundario marcado. Solo enzimas libres. Solo fluoróforos.

¿Cuál es un sustrato común de la peroxidasa de rábano (HRP)?. Ponceau. ECL (quimioluminiscencia). Azul de Bromofenol. Hematoxilina.

¿Qué método de detección usa cámaras CCD para capturar la señal?. Colorimetría. Quimioluminiscencia. Fluorescencia. Radiografía.

En colorimetría, la señal se mide mediante: Microscopio. Densitómetro o espectrofotometría. Cámara digital. Radiografía.

Una aplicación clínica del Western blot es: Diagnóstico de VIH. Determinar mutaciones genéticas. Secuenciación de ADN. Medición de ARN mensajero.

Otra aplicación del Western blot es: Enfermedad de Lyme. Electroforesis capilar. PCR cuantitativa. ELISA indirecto.

La comparación correcta es: Southern blot → ADN, Northern blot → ARN, Western blot →. Proteínas. Lípidos. Carbohidratos. Enzimas.

La electroforesis en gel de acrilamida permite separar proteínas según: Longitud de fragmento. Peso molecular. Actividad catalítica. Carga neta.

El uso de marcadores de peso molecular es importante para: Determinar la secuencia de aminoácidos. Comparar el tamaño de las proteínas en la muestra. Identificar mutaciones. Medir pH.

El anticuerpo secundario en Western blot suele estar unido a: Una proteína estructural. Una enzima como HRP o fosfatasa alcalina. Ácido nucleico. Detergentes.

¿Cuál de los siguientes NO es un sistema de detección en Western blot?. Quimioluminiscencia. Fluorescencia. Colorimetría. Microscopía electrónica.

La incubación con el tampón de carga más SDS se realiza típicamente a: 25 °C por 1 hora. 95 °C por 5-10 min. 4 °C por 24 horas. 60 °C por 30 min.

¿Qué proteínas inertes se utilizan para el bloqueo de la membrana?. Actina y tubulina. Albúmina o leche. Ferritina. Fibrinógeno.

El epítopo reconocido por un anticuerpo es: La secuencia completa de la proteína. Una región específica de la proteína. El gen que la codifica. El marcador de peso molecular.

En electroforesis, el **persulfato de amonio** se utiliza como: Inhibidor de radicales. Generador de radicales libres. Agente de tinción. Regulador del pH.

Una conclusión clave sobre el Western blot es que: Se usa solo para ADN. Es una técnica cuantitativa de proteínas sin necesidad de anticuerpos. Es una técnica inmunológica que identifica proteínas específicas. Es reemplazada totalmente por ELISA.